英文名稱DiR iodide
中文名稱DiR 碘化物(細胞膜紅色熒光探針)
別 名1,1'-Dioctadecyl-3,3,3',3'-Tetramethylindotricarbocyanine Iodide; DiR; DiIC18(7);
保存條件Store at -20℃, protect from light.
產品介紹DiR is a lipophilic carbocyanine near infrared fluorescent dye.
DiD,DiO,DiI,DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料,可以用來染細胞膜和其它脂溶性生物結構。當與細胞膜結合后其熒光強度大大增強,這類染料有著很高的淬滅常數和激發(fā)態(tài)壽命。一旦對細胞染色,這類染料在整個細胞膜上擴散,*濃度時可以使整個細胞膜染色。它們的熒光顏色區(qū)分明顯:DiI(橙色熒光),DiO(綠色熒光),DiD(紅色熒光)和 DiR (深紅色熒光)這使得他們可以用來對活細胞進行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分別用標準的 FITC和TRITC的濾光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激發(fā),有著比DiI更長的激發(fā)波長和發(fā)射波長,在細胞和組織染色中更有價值。 DiR的紅外熒光可以穿透細胞和組織,在活體成像中用來示蹤。
儲存條件:-20℃干燥避光保存,有效期一年。
溶解性:可溶于無水乙醇、DMSO和DMF,其中在DMSO中溶解度大于10mg/ml。發(fā)現較難溶解時可以適當加熱,并用超聲處理以促進溶解。
使用方法
1. DiD,DiO,DiI,DiR和DiS細胞膜染色液制備
(1)配置DMSO或EtOH 儲存液:儲存液用 DMSO或EtOH配置濃度1~5 mM。
注意:未使用的儲存液保存在-20 oC,避免反復凍融。
(2)工作液制備:用合適的緩沖液(如:無血清培養(yǎng)基,HBSS或PBS)稀釋儲存液,配制濃度為1~5 μM的工作液。
注意:工作液的最終濃度是根據不同細胞和實驗的經驗來配制?？梢詮耐扑]濃度的十倍以上尋找*條件。
2. 懸浮細胞染色
(1)懸浮細胞密度為 1 × 106/mL加入到工作液中。
(2)在37 ℃培養(yǎng)細胞 2~20分鐘,不同的細胞*培養(yǎng)時間不同。
(3)染色細胞試管在1000~1500轉離心5分鐘。
(4)傾倒上清液,再次緩慢加入預溫37℃的培養(yǎng)液。
(5)重復(3),(4)步驟兩次以上。
3. 粘壁細胞的染色
(1)使粘壁的細胞在無菌實驗室培養(yǎng)。
(2)從培養(yǎng)基中移走蓋玻片,吸走過量培養(yǎng)液,將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。
(3)在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液,輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。
(4)在37 ℃培養(yǎng)細胞 2~20分鐘,不同的細胞*培養(yǎng)時間不同。
(5)吸干染料工作液,用培養(yǎng)液洗蓋玻片2~3次,每次用預溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細胞,培養(yǎng)5~10分鐘,然后吸干培養(yǎng)基。
4. 顯微鏡檢測
(1)DiD,DiO,DiI,DiR和DiS濾光器的選擇參見表1。
(2)多色染料的同時檢測,濾光器按照以下設定:
a) DiI和DiO=Omega XF52,Chroma 51004;
b) DiI和DiD=Omega XF92,Chroma 51007;
c) DiI,DiO和DiD=Omega XF93,Chroma 61005
5. 流式細胞儀的檢測
DiD,DiO,DiI,DiR和DiS 染色的細胞可以分別用經典的FL1,FL2,FL3和FL4流式細胞儀檢測。
關鍵字： 細胞膜熒光探針深紅色DiR碘化物;100068-60-8;
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