產(chǎn)品簡(jiǎn)介

  Annealing Buffer for DNA Oligos (5×)，即 DNA 寡核苷酸退火緩沖液，該退火緩沖液不僅可以用于常規(guī) DNA Oligos 的退火，而且特別適合于較難退火的構(gòu)建 RNAi（siRNA 和 shRNA） 質(zhì)粒的 DNA Oligos，可以有效避免 DNA Oligos 自身形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，并且兩條 Oligos 退火后可以直接和經(jīng)酶切純化的質(zhì)粒連接。通常轉(zhuǎn)化后可以得到大量的陽(yáng)性克隆。

保存條件

  常溫配送。一個(gè)月內(nèi)，4 oC 保存。-20 oC 長(zhǎng)期保存，至少1年有效。

注意事項(xiàng)

1. DNA退火緩沖液（5×）只適合于 DNA Oligos 的退火，不能用于 RNA Oligos 的退火。

2. 本產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究，不得用于臨床診斷和治療，不得用于食品和藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

使用說明

1.將 Oligos 干粉用雙蒸水配制成 50 μM，融化 DNA 退火緩沖液（5×） ，混勻備用。

2.配置如下退火反應(yīng)體系，混勻。

Nuclease-Free Water     40 μL    

DNA 退火緩沖液（5×）     20 μL    

DNA Oligo A (50 μM)     20 μL    

DNA Oligo B (50 μM)     20 μL    

總體積     100 μL   

3.退火方法一： 將退火反應(yīng)體系置于 PCR 儀中， 設(shè)置反應(yīng)條件： 95℃變性 2 min， -1℃/30s/cycle 緩慢降溫至 25℃。 程序設(shè)置以 Bio-Rad 的 T100 為例為： 1. 95℃, 2:00; 2. 95℃, 0:30, -1℃ per cycle; 3. GOTO step 2,70X; 4. 4℃, ∞。

    對(duì)于易形成發(fā)卡結(jié)構(gòu)的 Oligos 可以延長(zhǎng)時(shí)間降溫時(shí)間： 95℃變性 2 min， -1℃/90s/cycle 緩慢降溫至25℃。 程序設(shè)置以 Bio-Rad 的 T100 為例為： 1. 95℃, 2:00; 2. 95℃, 1:30, -1℃ per cycle; 3. GOTO step 2,70X; 4. 4℃, ∞。

4.退火方法二： 將退火反應(yīng)體系放于 95°C 水浴鍋或金屬浴， 持續(xù) 2 min，后將退火反應(yīng)體系置于一杯 95°C的水中，讓其自然冷卻至室溫。 若是易形成發(fā)卡結(jié)構(gòu)的 Oligos，可以將95°C 水放于保溫杯中開蓋降溫。
   Note： 緩慢降溫對(duì)形成正確的結(jié)構(gòu)是非常有幫助的，降溫過快將導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)構(gòu)的產(chǎn)生。

5.退火結(jié)束后可直接用于連接反應(yīng)，也可以-20oC 凍存?zhèn)溆谩?若進(jìn)行酶切等其它反應(yīng)，更好用純化試劑盒進(jìn)行純化，或者確保退火產(chǎn)物在反應(yīng)體系中體積不超過 5%，以避免退火緩沖液對(duì)后續(xù)酶反應(yīng)體系的干擾。

6.為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。