產(chǎn)品簡(jiǎn)介

紅細(xì)胞裂解液（Red Blood Cell Lysis Buffer，或稱ACK Lysis Buffer），是一種經(jīng)典的用于從人或鼠等的血液或組織樣品中去除無(wú)核紅細(xì)胞的裂解液，幾乎不損傷淋巴細(xì)胞（lymphocyte）或其它有核細(xì)胞。本產(chǎn)品是利用細(xì)胞內(nèi)滲透壓濃度差而導(dǎo)致細(xì)胞膜脹破的原理裂解紅細(xì)胞。主要成分包含氯化銨、碳酸氫鉀、Na₂EDTA。因銨根離子無(wú)法通過(guò)細(xì)胞膜，而其他離子可以通過(guò)，造成細(xì)胞內(nèi)外的離子濃度差異，外部水分?jǐn)U散至細(xì)胞內(nèi)，使紅細(xì)胞膨脹，達(dá)到裂解效果。

經(jīng)紅細(xì)胞裂解液裂解得到的組織細(xì)胞中不含紅細(xì)胞，可進(jìn)一步用于淋巴細(xì)胞的分離純化、原代培養(yǎng)、細(xì)胞融合、流式細(xì)胞分析、核酸與蛋白的提取等。本裂解液適用于人，大小鼠等哺乳動(dòng)物新鮮血液，不適用于有核紅細(xì)胞的裂解，例如鳥或禽類的紅細(xì)胞。本產(chǎn)品經(jīng)過(guò)無(wú)菌處理。

保存條件

常溫配送。4 oC保存，1年有效。

注意事項(xiàng)

1．本產(chǎn)品為無(wú)菌試劑，使用時(shí)請(qǐng)注意無(wú)菌操作，避免細(xì)菌污染。

2．通常情況下，血液樣品與紅細(xì)胞裂解液按1:3比例裂解，對(duì)一些特殊病例如白血病、紅細(xì)胞增多癥等，建議采用1:4或更高比例以保證結(jié)果。

3．在離心洗滌后，如發(fā)現(xiàn)極微量的紅細(xì)胞，可繼續(xù)試驗(yàn)，不會(huì)影響后續(xù)檢測(cè)。

4．本產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究，不得用于臨床診斷和治療，不得用于食品和藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

5．為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用說(shuō)明

對(duì)于組織細(xì)胞樣本：

1．新鮮組織經(jīng)過(guò)膠原酶或胰酶等消化處理，通過(guò)適當(dāng)方法分散成細(xì)胞懸液，離心棄上清。

2．加入3-5倍細(xì)胞體積的紅細(xì)胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2 min。例如細(xì)胞沉淀的體積為1 mL，則加入3-5 mL的紅細(xì)胞裂解液。本步驟在室溫或4℃操作均可。

3．400-500 g離心5 min，棄紅色上清。4oC離心效果更佳。

4．如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的一些檢測(cè)。

5．洗滌1-2次：加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液，重懸沉淀，400-500 g離心2-3 min，棄上清?？稍僦貜?fù)1次，共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應(yīng)至少為細(xì)胞沉淀體積的5倍。4oC離心效果更佳。

6．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

對(duì)于組織細(xì)胞樣本無(wú)需洗滌的快速操作：

1．新鮮組織經(jīng)過(guò)膠原酶或胰酶等消化處理，通過(guò)適當(dāng)方法分散成細(xì)胞懸液，離心棄上清。

2．對(duì)于0.2 mL細(xì)胞沉淀加入1 mL紅細(xì)胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2 min。本步驟在室溫或4oC操作均可。

3．加入15-20 mL PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液，混勻。

4．400-500 g離心5 min，棄紅色上清。4oC離心效果更佳。

5．如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的一些檢測(cè)。

6．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

說(shuō)明：對(duì)于常規(guī)步驟，多一步洗滌過(guò)程中的離心，但可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好一些，同時(shí)不需要大體積的離心管?？焖俨襟E少了一次離心，但洗滌效果略差一些，同時(shí)需要大體積的離心管。

對(duì)于血液樣本：

1．取新鮮抗凝血，400-500 g離心5 min，棄上清。

2．加入6-10倍細(xì)胞體積的紅細(xì)胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2 min。例如細(xì)胞沉淀的體積為1 mL，則加入6-10 mL的紅細(xì)胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。注意：對(duì)于鼠的血液，裂解1-2 min已經(jīng)足夠，對(duì)于人的外周血，宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間至4-5 min，并且裂解過(guò)程中宜適當(dāng)偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。

3．400-500 g離心5 min，棄紅色上清。 4oC離心效果更佳。

4．如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的一些檢測(cè)。

5．洗滌1-2次：加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液，重懸沉淀，400-500 g離心2-3 min，棄上清?？稍僦貜?fù)1次，共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應(yīng)至少為細(xì)胞沉淀體積的5倍。4oC離心效果更佳。

6．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

注意：對(duì)于微量或少量的血液樣品，可以在步中不進(jìn)行離心棄上清的操作，直接在第二步中加入10倍血液體積的紅細(xì)胞裂解液，并在室溫或4oC裂解4-5 min。對(duì)于鼠的血液，裂解4-5 min已經(jīng)足夠，對(duì)于人的外周血，宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間至10 min，但通常不宜超過(guò)15 min，并且裂解過(guò)程中宜適當(dāng)偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。后續(xù)步驟相同。

對(duì)于血液樣本無(wú)需洗滌的快速操作：

1．每1 mL新鮮抗凝血中加入10 mL紅細(xì)胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解4-5 min。本步驟在室溫或4度操作均可。注意：對(duì)于鼠的血液，裂解4-5 min已經(jīng)足夠，對(duì)于人的外周血，宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間至10 min，但通常不宜超過(guò)15 min，并且裂解過(guò)程中宜適當(dāng)偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。

2．加入20-30 mL PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液，混勻。

3．400-500 g離心5 min，棄紅色上清。4oC離心效果更佳。

4．如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的一些檢測(cè)。

5．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

說(shuō)明：對(duì)于常規(guī)步驟，多一步洗滌過(guò)程的離心，但可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好一些，同時(shí)不需要大體積的離心管。快速步驟少了一次離心，但洗滌效果略差一些，同時(shí)需要大體積的離心管。