一、 試劑盒簡介
本試劑盒是簡單快速從單細(xì)胞到cDNA的一步法試劑盒，無需復(fù)雜的RNA提取步驟，就可以從1-1000個(gè)細(xì)胞中獲得cDNA。因?yàn)榧?xì)胞數(shù)少，RNA比較少，所以本試劑盒是將逆轉(zhuǎn)錄和預(yù)擴(kuò)增同時(shí)進(jìn)行。只需預(yù)先設(shè)計(jì)預(yù)擴(kuò)增引物，就可以獲得高質(zhì)量的cDNA。
二、 產(chǎn)品組分
Components | B0011 (100 Rxns) |
Cell Lysis Buffer | 5.5 ml |
2× Pre-Amp Mix | 1.1 ml |
ddH2O | 1 ml |
三、 保存條件
此試劑盒建議置于-20℃冰箱中保存。
四、試劑盒特點(diǎn)
1、簡單、快速：僅需2步即可得到高質(zhì)量的cDNA。
2、所需樣品少：最低可提取單個(gè)細(xì)胞。
3、安全無毒：不使用苯酚、氯仿、異丙醇、DEPC水等對身體有害的物質(zhì)。
四、 預(yù)擴(kuò)增引物設(shè)計(jì)
1、 建議qPCR引物和預(yù)擴(kuò)增引物在設(shè)計(jì)時(shí)靠近mRNA的3，端，以便確保被充分?jǐn)U增。
2、 預(yù)擴(kuò)增引物和qPCR引物進(jìn)行跨內(nèi)含子設(shè)計(jì)：即其擴(kuò)增產(chǎn)物跨1個(gè)內(nèi)含子。
3、 需要將qPCR擴(kuò)增產(chǎn)物所在的序列包含在內(nèi)（即預(yù)擴(kuò)增引物需要在qPCR引物的外側(cè)，上游更偏5，端，下游更偏3，端）。
五、 注意事項(xiàng)
1、本試劑盒是專為qPCR設(shè)計(jì)的，盡量不要用于基因克隆。
2、細(xì)胞從培養(yǎng)箱中取出后建議放在室溫，切勿放在冰上，以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
3、Cell Lysis Buffer解凍后，需顛倒幾次使之充分混勻，再放在冰上以備使用，請勿渦旋振蕩。
4、如果qPCR結(jié)果內(nèi)參Ct值明顯偏大，則預(yù)擴(kuò)增循環(huán)數(shù)可以由14個(gè)Cycle增加3個(gè)Cycle到17個(gè)Cycle。
關(guān)鍵字： cDNA提取，試劑盒，單細(xì)胞;