肌酸激酶（Creatine Kinase, CK）測(cè)定試劑盒說明書
分光光度法50管/48樣
注 意：注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
CK(EC 2.7.3.2)主要存在于心臟、肌肉以及腦等組織中，能可逆地催化肌酸與ATP之間的轉(zhuǎn)磷?；磻?yīng)，在能量運(yùn)轉(zhuǎn)、肌肉收縮和ATP再生中有重要作用，是臨床診斷心腦疾病的一個(gè)重要指標(biāo)。
測(cè)定原理：
CK催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP，己糖激酶催化ATP與葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脫氫酶催化6-磷酸葡萄糖與NADP+生成NADPH，導(dǎo)致340nm光吸收值增加。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、低溫離心機(jī)、恒溫水浴鍋、紫外分光光度計(jì)、1 mL石英比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑1瓶，4℃避光保存，使用前加15mL蒸餾水溶解。
試劑二：液體15mL×1瓶，4℃保存。
工作液：臨用前根據(jù)用量將試劑一和試劑二以1:1混合。使用前37℃溫育2min。
粗酶液提取：
1. 組織樣本：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g，4℃離心15min，取上清，置冰上待測(cè)。
2. 血清樣本：直接測(cè)定。
測(cè)定操作表：
1. 紫外分光光度計(jì)預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2．在1 mL石英比色皿中加入200μL樣本和300μL蒸餾水，最后加入500μL工作液，立即混勻，37℃下測(cè)定初始吸光值A1與1min后的吸光值A2，ΔA＝A2-A1。
CK活性計(jì)算公式：
1、按組織蛋白含量計(jì)算
酶活定義：37℃，pH7.0時(shí)，每毫克蛋白質(zhì)1min內(nèi)催化產(chǎn)生1nmol NADPH為一個(gè)酶活單位。
CK活性（nmol/min / mg prot）=
×V反總÷(V樣×Cpr)= 804×△A÷Cpr
2、按組織樣本質(zhì)量計(jì)算：
酶活定義：37℃，pH7.0時(shí)，每克樣品1min內(nèi)催化產(chǎn)生1nmol NADPH為一個(gè)酶活單位。
CK活性（nmol/min /g 鮮重）=×V反總÷(V樣÷V樣總×W)= 804×△A÷W
3. 按血清計(jì)算：
酶活定義：37℃，pH7.0時(shí)，每升血清1min內(nèi)催化產(chǎn)生1nmol NADPH為一個(gè)酶活單位。
CK活性（nmol/min /L）=×V反總÷V樣= 804×△A
：NADPH摩爾消光系數(shù)，6220 L /mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，1mL；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.2mL；T，反應(yīng)時(shí)間，1min；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g
注意事項(xiàng)
1. 配制好的工作液4℃穩(wěn)定7天，請(qǐng)配制后盡快使用。
2. 血清的CK不穩(wěn)定，采集樣本后盡快測(cè)定，4℃避光保存可穩(wěn)定24h。
3. 樣品蛋白質(zhì)含量需要另外測(cè)定，可選用BCA蛋白含量測(cè)定試劑盒進(jìn)行測(cè)定。
4. OD值大于0.5可用提取液適當(dāng)稀釋樣品，并在計(jì)算公式中相應(yīng)的改變稀釋倍數(shù)。
關(guān)鍵字： 肌酸激酶（Creatine Kinase;肌酸激酶（Creatine Kinase;
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