BCA法蛋白濃度測(cè)定試劑盒
一、產(chǎn)品簡介。
BCA 法蛋白濃度測(cè)定試劑盒是目前測(cè)定蛋白濃度的常用試劑，含有 BCA（bicinchonininc acid）的 A 液與含有二價(jià)銅離子 B 液混合，即成為蘋果綠的 BCA 工作液。加入含有蛋白質(zhì)的樣品后，工作液中的 BCA 與蛋白質(zhì)結(jié)合后，蛋白質(zhì)將 Cu2+還原為 Cu+，工作液由原來的綠色變成紫色，在 562nm 處具有吸收峰，且光吸收值與蛋白質(zhì)濃度成正比。因此，可以通過測(cè)定工作液的光吸收值來計(jì)算樣品中的蛋白濃度。
二、運(yùn)輸與存儲(chǔ)條件。
本產(chǎn)品低溫運(yùn)輸，各組份依據(jù)保存條件分開保存，有效期 12 個(gè)月。
三、特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì)。
1. 靈敏度高。檢測(cè)濃度下限達(dá)到 10 μg/ml，最小檢測(cè)蛋白量達(dá)到 0.2 μg。
2. 抗干擾能力強(qiáng)。常用濃度的去垢劑，如 SDS，Triton X-100，Tween-20 不影響檢測(cè)結(jié)果。
四、自備試劑與耗材。
ddH2O，96 孔板等。
五、使用說明（96 孔板法）。
1. 配制 BCA 工作液。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣品數(shù)量，按照每個(gè)樣品需要200 μL工作液的標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算工作液體積，并按照BCA-A液：BCA-B液=50:1的比例配制BCA工作液。
2. 將蛋白標(biāo)準(zhǔn)品用ddH2O稀釋50倍，配制成0.5 mg/mL。
3. 將稀釋的蛋白標(biāo)準(zhǔn)液加入96孔板孔中，體積分別為0、1、2、4、8、12、16、20 μl，并加入滅菌ddH2O補(bǔ)足體積到20 μl，對(duì)應(yīng)的蛋白濃度分別為0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/ml。
4. 將待測(cè)樣品加入96孔板孔，并利用滅菌ddH2O補(bǔ)足體積到20 μl。每組樣品設(shè)置3個(gè)重復(fù)。
5. 各孔加入200 μl BCA工作液，振蕩混勻，37 oC孵育30 min，冷卻至室溫。
6. 用酶標(biāo)儀測(cè)定562 nm處光吸收值（OD values），若無562 nm的濾光片，也可以測(cè)定540-595 nm波長的光密度值。
7. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品稀釋倍數(shù)計(jì)算蛋白濃度。
六、注意事項(xiàng)。
1. BCA法也可使用分光光度計(jì)測(cè)定，并根據(jù)比色皿的最小檢測(cè)體積，適當(dāng)加大BCA工作液用量，標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣品用量不變。
2. BCA法蛋白濃度測(cè)定試劑受螯合劑(EDTA，EGTA)、還原劑（DTT，巰基乙醇）、尿素、蔗糖和脂類的影響，應(yīng)保證蛋白樣品中不含有以上試劑。
3. BCA工作液與樣品混合后，可以37 ℃孵育30 min，也可以室溫放置2 h。
4. BCA法測(cè)定蛋白濃度時(shí)，工作液顏色會(huì)隨著孵育時(shí)間的延長不斷加深。并且顯色反應(yīng)會(huì)因溫度升高而加快。如果樣品中的蛋白濃度較低，可適當(dāng)延長孵育時(shí)間。
關(guān)鍵字： BCA法蛋白濃度測(cè)定試劑盒;BCA;
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