siRNA 轉(zhuǎn)染試劑 Omifection-R

一、產(chǎn)品簡介。

Omifection-R 是一款專門用于 siRNA 轉(zhuǎn)染的試劑，轉(zhuǎn)染效率高，細(xì)胞毒性低，在多種細(xì)胞系及原代細(xì)胞中都表現(xiàn)出良好的轉(zhuǎn)染效果。

二、運(yùn)輸與存儲(chǔ)條件。

本產(chǎn)品常溫運(yùn)輸， 4℃ 保存、嚴(yán)禁凍存。

三、特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì)。

1. 轉(zhuǎn)染效率高。與 Lipofectamine 2000 或 RNAi Max 等轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效率類似。

2. 細(xì)胞毒性低。在多種類型的細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中，Omifection-R 沒有表現(xiàn)出細(xì)胞毒性。

3. 使用方便。本產(chǎn)品不受血清和抗生素的影響，轉(zhuǎn)染前不用更換細(xì)胞培養(yǎng)液。

四、使用說明。

1. 以 6 孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)體系，轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)流程如下：

2. 細(xì)胞培養(yǎng)。胰酶消化法收集細(xì)胞并計(jì)數(shù)，接種到 6 孔細(xì)胞培養(yǎng)板，培養(yǎng) 24 h 后細(xì)胞密度達(dá)到30%-50%。（細(xì)胞密度太大不利于轉(zhuǎn)染）

3. siRNA 制備。利用 RNase-free ddH2O 溶解 siRNA 干粉，終濃度為 20 μM，即利用 125 μL 的RNase-free ddH2O 溶解 1 OD（33 μg 或 2.5 nM）siRNA 干粉，充分震蕩（vortex）使其溶解。

4. 轉(zhuǎn)染復(fù)合體制備。準(zhǔn)備 2 個(gè)無菌 EP 管，各加入 100 μL OPTI-MEM 培養(yǎng)液 (Gibco），其中一管加入 6 μL Omifection-R，混合 10 次，室溫靜置 5 min。另外一管加入 6 μL siRNA（20 μM）溶液，混勻。將 Omifection-R 混合液滴加到 siRNA 混合液中，混勻，室溫靜置 30 min（5-30min，但孵育 30 min 轉(zhuǎn)染效果更好），制備轉(zhuǎn)染復(fù)合體。

5. 細(xì)胞轉(zhuǎn)染。將轉(zhuǎn)染復(fù)合體滴加入細(xì)胞培養(yǎng)液中，輕搖混勻，轉(zhuǎn)入 CO2 培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

6. 換液。轉(zhuǎn)染 6-12 h，更換成新鮮的細(xì)胞培養(yǎng)液。若無明顯細(xì)胞毒性，也可不用換液。

7. 轉(zhuǎn)染 24-48 h，利用 RT-PCR 檢測目的基因 mRNA 表達(dá)水平，或利用 Western blot 檢測目的蛋白表達(dá)水平。

五、注意事項(xiàng)。

1. 請(qǐng)利用對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染，以提高轉(zhuǎn)染效率。

2. 轉(zhuǎn)染 siRNA 時(shí)，細(xì)胞密度以 30-50%為宜。

3. 增加 Omifection-R 用量可以提高轉(zhuǎn)染效率，但也可能增加細(xì)胞毒性。

六、轉(zhuǎn)染效果鑒定。