質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑 Omifection
一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介。
Omifection 是一款非脂質(zhì)體類真核細(xì)胞 DNA 轉(zhuǎn)染試劑,主要用于質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染,在多種細(xì)胞中都具有較高的轉(zhuǎn)染效率和超低的細(xì)胞毒性,廣泛用于蛋白表達(dá)、文庫(kù)篩選和慢病毒包裝等實(shí)驗(yàn)。
二、運(yùn)輸與存儲(chǔ)。
本產(chǎn)品常溫運(yùn)輸,4 ℃保存,嚴(yán)禁凍存。
三、特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì)。
1. 轉(zhuǎn)染效率高。適用于多種類型細(xì)胞的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。
2. 細(xì)胞毒性低。Omifection 對(duì)多種細(xì)胞沒有細(xì)胞毒性。
3. 操作方便。本產(chǎn)品不受抗生素和血清的影響,轉(zhuǎn)染前細(xì)胞不用換液。
四、使用說明。
1. 以 6 孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)體系,細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)步驟如下:。
2. 細(xì)胞培養(yǎng)。胰酶消化法收集細(xì)胞,接種到 6 孔板中,24 h 后細(xì)胞密度達(dá)到 50%-80%。
3. 轉(zhuǎn)染復(fù)合體制備。移取 200 μL OPTI-MEM 培養(yǎng)液 (Gibco)加入滅菌的 EP 管(1.5 mL)中,再依次加入 2 μg 質(zhì)粒(體積依據(jù)質(zhì)粒濃度計(jì)算)和 6 μL Omifection 轉(zhuǎn)染試劑,混合 10-20 次,室溫靜置 15-30 min (30 min 轉(zhuǎn)染效果會(huì)更好),形成轉(zhuǎn)染復(fù)合體。
4. 細(xì)胞轉(zhuǎn)染。將轉(zhuǎn)染復(fù)合體加入細(xì)胞培養(yǎng)液中,輕搖混勻,轉(zhuǎn)入 CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
5. 轉(zhuǎn)染 6-12 h 后換液,48 h 檢測(cè)外源蛋白表達(dá)情況(如熒光顯微鏡下檢測(cè) GFP 熒光)。
五、注意事項(xiàng)。
1. 本產(chǎn)品嚴(yán)禁凍存,否則轉(zhuǎn)染效率降低。
2. 質(zhì)粒 DNA 與 Omifection 的比例(μg:μL)為 1:3 時(shí)能夠在大部分細(xì)胞中取得轉(zhuǎn)染效果。
3. Omifection 與質(zhì)粒 DNA 加入 OPTI-MEM 培養(yǎng)液中后,劇烈混合,以便徹底混勻,并需要靜置15-30 min,以便形成轉(zhuǎn)染復(fù)合體。
4. 轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)一般在細(xì)胞傳代 24 h 后進(jìn)行,保證細(xì)胞進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,生長(zhǎng)狀態(tài)良好。
5. Omifection 對(duì)大部分細(xì)胞沒有毒性,如果不考慮轉(zhuǎn)染試劑對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響,轉(zhuǎn)染后可以不換液。
六、轉(zhuǎn)染效果檢測(cè)。
HEK293 細(xì)胞接種于 6 孔板,24 h 后利用 Omifection 和 Lipofectamine 2000(LIPO 2000)轉(zhuǎn)染綠色熒光蛋白(GFP)編碼質(zhì)粒,48 h 后熒光顯微鏡下檢測(cè) GFP,并拍照。
關(guān)鍵字: 質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑;Omifection;
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