"GBC-SD:人膽囊癌復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

細胞生長：貼壁

有一些細胞是數量多一點比較HAO生長，生長狀態(tài)也比較HAO。這種一般是屬于生長速度慢的細胞。譬如內皮細胞。而有一些是細胞是數量少一點細胞狀態(tài)會生長的比較HAO，譬如巨噬細胞和某些腫瘤細胞。尤其是巨噬細胞，生長速度非常得快，貼壁速度很快，所以傳代時就應該留很少量的細胞，這樣細胞狀態(tài)會比較HAO。并且巨噬細胞比較喜歡扎堆生長，而堆與堆之間是有空間的。如果長成相連在一起的一滿片的時候，細胞形態(tài)基本上就會差了，老化的會比較多，對后期實驗結果是不HAO的。所以在養(yǎng)細胞的時候應該摸索該細胞喜歡的生長空間密度問題。這個其實是有一個方法可以改善的。對于貼壁細胞，如果細胞形態(tài)不HAO，（或者細胞形態(tài)不清晰，表面似有異物等）可以在傳代的時候進行如下操作：首先，倒掉舊的培養(yǎng)基，加入3ml新的培養(yǎng)基（有無血清的都可）洗滌一次，用滴管吸走，然后再加入3ml的培養(yǎng)基，進行預吹打，控制吹打力度，輕輕地大概沿著瓶底過一遍，然后吸走。這時侯再開始正式的消化、吹打。（巨噬細胞建議只吹打，不消化）其次，把吹打下來的細胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶內，培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱內培養(yǎng)，按時間點觀察細胞貼壁情況。10分鐘觀察一次，20分鐘，30分鐘觀察一次。選擇一個時間點，已經有部分細胞貼壁的情況下，重新置于潔凈臺，底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基，加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。然后加入完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細胞生長情況以及形態(tài)。通常稱之為“二傳”。如果一次效果還不理想，可重復多次。直到找到細胞上乘形態(tài)。其中要注意，結合細胞喜歡的生長情況。喜歡多一點數量長得HAO的細胞你就等貼壁細胞比較多點的時候再傳。反之亦然。

細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

LS411N細胞類似產品：：H-510細胞、GM2219C細胞、MC-CAR細胞

Merwin Plasma Cell tumor-11細胞類似產品：：PAI細胞、SUM 190細胞、MCF12A細胞

NTERA-2cl.D1細胞類似產品：：DHBE細胞、MDA PCa 2b細胞、KCL22S細胞

AG 9細胞類似產品：：Ramos-RA1細胞、IAR20細胞、NCIH345細胞

[細胞產品包裝]鮮活細胞：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞：１ml凍存管(兩支)

細胞背景資料：GBC-SD 細胞株是王展明等２０００年從一位６１歲的男性低分化膽囊癌患者中建立的。 細胞的形狀有多邊形、紡錘形和正方形。 分泌CEA和CA１９-９。倍增時間大約為２１.４小時。 可移植到裸鼠。 生成的腫瘤與原發(fā)腫瘤相似。

GBC-SD:人膽囊癌復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

HCC0038細胞類似產品：：U-373MG細胞、Hs688(A)T細胞、J-774細胞

SMA 560細胞類似產品：：HPAF-II細胞、H2444細胞、I90細胞

HCC827細胞類似產品：：CAL 148細胞、CHO-S細胞、NTERA-2/D1細胞

細胞培養(yǎng)方面注意的幾點：無菌意識要強：實驗進行前，超凈臺以紫外燈照射３０分鐘滅菌，以７０%ethanol擦拭無菌操作抬面，并開啟超凈工作臺風扇運轉數分鐘后，才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株，以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以７０%ethanol擦拭無菌操作抬面。無菌操作工作區(qū)域應保持清潔及寬敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暫時放置，其它個人實驗用品用完應立即拿出。實驗用品以７０%乙醇擦拭后才帶入無菌操作臺內。實驗操作應在中央無菌區(qū)域，一般勿在邊緣區(qū)域操作。小心取用無菌之實驗物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約４５°角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。選擇正確的培養(yǎng)基：不同的細胞可能培養(yǎng)基不同，甚至不同的文獻可能對相同的細胞培養(yǎng)基成分也是可能不同的。如我當時培養(yǎng)神經干細胞，有文獻就選用neurobase培養(yǎng)基，而我的實驗目的主要是做抗氧化和氧化方面的，而這種培養(yǎng)基中含有抗氧化劑成分，此時，我就不得不選擇另外一種不含抗氧化劑的培養(yǎng)基。瓶裝血清一定要逐步解凍:４℃冰箱全溶后再分裝，在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由–２０℃直接至３７℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質凝結而發(fā)生沉淀。熱滅活是指５６℃，３０分鐘加熱已完全解凍之血清。水浴鍋升到５６℃后，將血清放入，待溫度升GAO到５６℃后計時，一般５分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補體成份去活化。除非必須，一般不要作此熱處理，因為會造成沉淀物之顯著增多，且會影響血清之品質。注意更換新血清(包括不同批次)對細胞的影響。

細胞傳代方法：１：２傳代

細胞來源說明：來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫

GBC-SD:人膽囊癌復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

細胞生長特性：貼壁生長

貼壁細胞傳代：去掉原T25培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)基，T25瓶加3-4ml PBS洗1-2次；棄PBS，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA(1X)消化液消化細胞，顯微鏡下觀察，待細胞變圓，細胞間隙明顯，部分細胞剛開始脫離瓶壁，加4 ml左右完全培養(yǎng)液混勻終止消化，將細胞小心吹打下來，1000rpm/min室溫離心5min；棄上清，細胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶（視細胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8），每T25瓶補足培養(yǎng)基至5-6ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。懸浮細胞傳代：一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中，稀釋細胞濃度即可，若培養(yǎng)液太多時，將細胞懸液移入離心管中，1000rpm/min 室溫離心5min。棄上清，細胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶（視細胞密度而定1:4-1:8），每T25瓶加完全培養(yǎng)液至4-5ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。有些懸浮細胞趨于成團生長，此時細胞生長狀態(tài)良HAO，當補液時，需避免反復吹打。

GM2131細胞類似產品：：RT-112細胞、P3-X63-Ag8-6-5-3細胞、PIEC細胞

Y3-Ag 1.2.3細胞類似產品：：0V-1063細胞、DU_145細胞、ECC-10細胞

SKNBE(2c)細胞類似產品：：Melan-a細胞、HCA 7細胞、NCI-H522細胞

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TJ905細胞類似產品：：CCC-HEL-1細胞、SNU-407細胞、Pa017C細胞

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GBC-SD:人膽囊癌復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

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NCI-H1395細胞類似產品：：NCI-HUT-520細胞、MESSA細胞、H-748細胞

VSC4.1細胞類似產品：：UCH-1細胞、KE-37細胞、118 MG細胞

GBC-SD:人膽囊癌復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

HPAF-2細胞類似產品：：L Wnt-3A細胞、NCI-H2107細胞、HMC3細胞

YAC細胞類似產品：：NUGC-2細胞、SUDHL5細胞、MCA-205細胞

NPC-TW 039細胞類似產品：：Leghorn Male Hepatoma cell line細胞、LLC PK1細胞、CAL51細胞

HTh74細胞類似產品：：NCI-H1568細胞、KG1A細胞、KY-50細胞

KU 19-19細胞類似產品：：Bovine Turbinate細胞、NCIH2141細胞、Caco-2BBe細胞

Tu 212細胞類似產品：：H-187細胞、769P細胞、ssMCF7細胞

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