血漿/血清,外泌體總RNA提取試劑盒-升級款基于自主研發(fā)的均質(zhì)液體磁珠,可特異性捕獲外泌體,而無需吸附雜質(zhì),實現(xiàn)外泌體總RNA的高純度和高回收率操作、高純度和高回收率,使其特別適合從血漿和血清。提取的外泌體RNA可用于逆轉(zhuǎn)錄、RT-PCR、RT-qPCR、RIP、NGS和其他研究應(yīng)用。
艾美捷血漿/血清,外泌體總RNA提取試劑盒-升級款:
編號:A-EXO009
規(guī)格:50T
儲存:4°C(12個月)
ExoMag外泌體磁珠加強版 5毫升 4°C
提取緩沖液 50毫升 4°C
溶液A 2 x 125毫升 4°C
DEPC處理水 1毫升 4°C
1.5毫升無核酸酶管 50支 室溫
材料需自備但未提供:
高速冷凍離心機
平臺搖床
1.5毫升離心管
磁力架
冰盒
氯仿、異丙醇、75%乙醇等
樣本前處理:
1. 細胞去除:在4°C下,以300 g離心樣本5分鐘。將上清液轉(zhuǎn)移到新的離心管中。
對于無細胞樣本,可以跳過此步驟。
2. 細胞和細胞碎片去除:在4°C下,以2000 g離心樣本10分鐘。將上清液轉(zhuǎn)移到新的離心管中。
3. 大顆粒去除:將第二步得到的上清液在4°C下,以14000 g離心30分鐘。將上清液轉(zhuǎn)移到新的離心管中。
外泌體富集:
1. 將100微升的ExoMag外泌體磁珠加強版轉(zhuǎn)移到1.5毫升離心管中,并將其放置在磁力架上30秒。丟棄磁珠保護溶液。
2. 向上述ExoMag外泌體磁珠加強版中加入500微升的預(yù)處理樣本(如果處理的樣本體積小于500微升,只需使用溶液A將樣本體積補足至500微升)。將管固定在平臺搖床上,在室溫下以17轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速孵育30分鐘。
在某些樣本中,ExoMag外泌體磁珠加強版在與外泌體結(jié)合過程中可能會聚集在一起。然而,這種聚集不影響分離效率,因此您可以信心滿滿地繼續(xù)使用它們。
3. 將上述離心管放置在磁力架上,靜置30秒,然后丟棄上清液。
4. 加入1毫升溶液A,通過翻轉(zhuǎn)管子混合,然后放置在磁力架上,靜置30秒,然后丟棄上清液。
5. 再重復(fù)第四步兩次,保留ExoMag外泌體磁珠加強版。
重要注意事項:
提取緩沖液中含有苯酚,苯酚具有毒性和腐蝕性。吸入、皮膚接觸或吞食可能導(dǎo)致中毒、燒傷和其他身體傷害。使用時應(yīng)穿戴實驗室大衣、手套、護目鏡和口罩等防護裝備。如果不慎接觸到眼睛,應(yīng)立即用大量水沖洗并尋求醫(yī)療幫助。
RNA提取應(yīng)在冰上進行。
穿戴實驗室服裝和一次性手套,以避免RNase污染。
采取措施防止RNA提取中使用的耗材受到RNase污染。應(yīng)使用無RNase水配制溶液。
準(zhǔn)備氯仿、異丙醇(新開封或?qū)S糜赗NA提取)、75%乙醇(用DEPC處理水配制)和無RNase水。
RNA的半衰期相對較短,容易降解。建議提取后立即進行進一步實驗。
為了您的安全和健康,在操作過程中穿戴實驗室服裝和一次性手套。
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