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細(xì)胞中的小黑點(diǎn)是如何產(chǎn)生的?如何避免?
發(fā)布日期:2022/10/28 9:30:23發(fā)布人:上海源葉生物科技有限公司

在正常培養(yǎng)細(xì)胞的情況下,我們時(shí)常會(huì)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞出現(xiàn)一些小黑點(diǎn),有些小黑點(diǎn)隨著細(xì)胞數(shù)量的增長(zhǎng)而增長(zhǎng),有一些則不會(huì),那么這些小黑點(diǎn)到底是什么?會(huì)影響細(xì)胞增長(zhǎng)嗎?

| 細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)的小黑點(diǎn)可以分為以下幾類:

1. 細(xì)胞碎片 
在細(xì)胞培養(yǎng)中不合適操作引起的化學(xué)或物理上的刺激,例如胰酶消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng),會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡,從而產(chǎn)生很多碎片。

2. 凋亡小體 
在體外培養(yǎng)條件下,細(xì)胞很容易受到環(huán)境改變的影響,誘發(fā)細(xì)胞的凋亡,產(chǎn)生凋亡小體。

3. 血清中的沉淀
經(jīng)過(guò)熱處理的血清中,作為常見(jiàn)沉淀物質(zhì)的磷酸鈣會(huì)顯著增多,且由于布朗運(yùn)動(dòng)會(huì)看上去可以活動(dòng)。

4. 支原體污染
由于支原體的污染,導(dǎo)致出現(xiàn)的小黑點(diǎn),明顯影響細(xì)胞增長(zhǎng)。

| 細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中如何避免產(chǎn)生小黑點(diǎn)?

懸浮細(xì)胞:
收集細(xì)胞上清慢速離心(500~600 rpm/min,5~6 min)并更換新的培養(yǎng)瓶。
貼壁細(xì)胞:
將細(xì)胞用 PBS 洗 2~3 遍,洗的時(shí)候,輕輕拍打培養(yǎng)瓶,讓貼壁不牢的碎片和顆粒脫落,再棄去 PBS,消化時(shí)先加低濃度的胰酶如 0.05% 胰酶消化 1 min 左右,讓細(xì)胞間隙中的顆粒和碎片脫落下來(lái),去掉低濃度胰酶,然后正常消化細(xì)胞,將收集的細(xì)胞懸液慢速離心(500~600 rpm/min,5~6 min)并更換新的培養(yǎng)瓶,并可以嘗試適當(dāng)增加血清濃度進(jìn)行培養(yǎng)。

如果懷疑黑點(diǎn)是支原體污染,可進(jìn)行支原體檢測(cè),檢測(cè)陽(yáng)性請(qǐng)及時(shí)將細(xì)胞處理后丟棄。比較珍貴的細(xì)胞,可以嘗試使用支原體清除劑去除,并與其他細(xì)胞分開(kāi)培養(yǎng)。

| 注意事項(xiàng):

1. 掌握細(xì)胞傳代的時(shí)機(jī),不要細(xì)胞長(zhǎng)老了再傳代;
2. 掌握好消化時(shí)間,防止消化過(guò)度產(chǎn)生細(xì)胞碎片;
3. 減少血清等試劑的凍融次數(shù);
4. 將培養(yǎng)液的 PH 調(diào)到;
5. 嚴(yán)格控制水質(zhì)和器皿的清潔。


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