牛結(jié)節(jié)性皮膚病抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）使用說明書http://www.yajimall.com/
【產(chǎn)品名稱】
通用名：牛結(jié)節(jié)性皮膚病抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Lumpy Skin Disease （ELISA）
【包裝規(guī)格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒
【預(yù)期用途】 又稱牛疙瘩皮膚病、牛結(jié)節(jié)疹，是由牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒（LSDV）引起牛的一種急性、亞急性或慢性傳染病。
本試劑盒用于檢測牛血清中牛結(jié)節(jié)性皮膚病抗體，可用于疫苗免疫效果評價或該病的輔助診斷。
【原 理】
本試劑盒由預(yù)包被牛結(jié)節(jié)性皮膚病核蛋白抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測牛血清樣本中牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒抗體。實驗時在酶標(biāo)板中加入對照血清和待檢樣本，經(jīng)溫育后若樣品中含有牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒抗體，則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后；再加入酶標(biāo)記物，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物，在孔中加 TMB 底物液，與酶標(biāo)結(jié)合物反應(yīng)形成藍色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中抗體含的特異性量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒抗體。
【試劑盒組成】
【儲存及有效期】 2～8℃保存，有效期12個月。
包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。
【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標(biāo)儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。
【樣品準(zhǔn)備】
1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。
2.用樣品稀釋液將待檢血清先按10倍稀釋（如在稀釋板中加入90μl樣品稀釋液再加10μl血清，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。
【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl；樣品孔每孔加入樣品稀釋液90μl，再加入稀釋后的血清10μl。
注：樣本稀釋比例相當(dāng)于1:100。
4.混勻，蓋好蓋板膜，置37℃（推薦水?。┍芄夥磻?yīng)30分鐘。
5.甩去孔內(nèi)液體，每孔加350μl工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，最后一次拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應(yīng)30分鐘。
7.洗滌，同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應(yīng)10分鐘。
9.每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。
【參考值】 實驗正常的情況下，陰性對照≤0.2，陽性對照≥0.6。
【檢驗結(jié)果的解釋】
1.樣品的 OD 值即 ODS；
2.閾值計算：SP 值 =（ODS-ODNC）/（ODPC-ODNC）；SP 值≥0.2，結(jié)果判定為陽性；SP 值＜0.2，結(jié)果判定為陰性。
3.本實驗結(jié)果為陰性時表明牛只抗體水平不足，建議補打相應(yīng)疫苗。
【試驗方法的局限性】
該試驗僅作為定性檢測牛血清中牛結(jié)節(jié)性皮膚病 IgG 抗體。
【注意事項】
1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時容易結(jié)晶，使用時需恢復(fù)至室溫以完全溶解。
5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。
7.試驗結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
8.不同批號試劑組分不得混用。