主營(yíng)產(chǎn)品:抗體,細(xì)胞,生物試劑等
客服熱線:021-34661275 15301693058
3YR企業(yè)會(huì)員
ELISA kit使用技巧http://www.yajimall.com/
1.樣本的準(zhǔn)備:盡量使用新鮮樣本,不使用有溶血,被細(xì)菌污染、標(biāo)本保存時(shí)間過長(zhǎng)和標(biāo)本凝固不全的樣本。ELISA檢測(cè)宜采集新鮮標(biāo)本,如不能立即測(cè)定,5天之內(nèi)應(yīng)4℃保存,對(duì)于1周后檢測(cè)的樣本應(yīng)低溫凍存;做好分裝,長(zhǎng)時(shí)間凍存的樣本避免反復(fù)凍融。
2.仔細(xì)閱讀說明書,熟悉整個(gè)流程,推薦畫出簡(jiǎn)要步驟圖;提前準(zhǔn)備試劑,比如常見20X洗滌液是濃縮液,需要用超純水提前稀釋準(zhǔn)備好。一般的檢測(cè)抗體和酶標(biāo)二抗需要用對(duì)應(yīng)的稀釋液稀釋至工作濃度。
3.不同批次的試劑不要混用,檢查各組分的有效期。
4.預(yù)包被的酶標(biāo)板條和各試劑組份需要室溫平衡30 min以上,這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需溫度,預(yù)防后續(xù)實(shí)驗(yàn)中由于孵育溫度或是時(shí)間不夠充分,而將一些弱陽(yáng)性樣本不能檢出。
5.待測(cè)樣本加樣:待檢樣本過多時(shí),建議分批操作;需要稀釋的樣本提前做好稀釋,注意選對(duì)合適稀釋液;控制好加樣時(shí)間,避免加樣費(fèi)時(shí)過長(zhǎng)造成誤差;注意加樣角度,垂直加入孔底,不要接觸孔壁, 做到一份樣本一個(gè)移液頭,防止交叉污染。
6.溫育和洗板:溫育時(shí)間和溫度一般根據(jù)試劑盒的說明書進(jìn)行選擇。溫育時(shí)可以采用水浴或者濕盒孵育,避免“邊緣效應(yīng)”。①手工洗板時(shí),拍板時(shí)要垂直,避免交叉污染,用力不能過猛,防止抗原抗體復(fù)合物脫離;②洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢。
7.顯色:市售ELISA 試劑盒中,一般是以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的顯色液,反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15~30 min。顯色反應(yīng)需要避光。
8.讀數(shù)和數(shù)據(jù)分析:終止后讀取結(jié)果盡量在15min內(nèi)完成,讀取OD值時(shí)酶標(biāo)儀需先預(yù)熱15~30 min再進(jìn)行。數(shù)據(jù)分析一般用四參數(shù)和直線擬合法,選擇哪種擬合方式,可以依據(jù)標(biāo)曲的相關(guān)系數(shù)(R2)來確定,R2一般需要大于0.99。
商家暫時(shí)不對(duì)外公布