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豬瘟病毒阻斷ELISA 抗體檢測試劑盒使用說明書
【產(chǎn)品名稱】
通用名:豬瘟病毒阻斷ELISA 抗體檢測試劑盒
英文名:Blocking ELISA Kit For Detection of Antibodies to Classical Swine Fever Virus
【包裝規(guī)格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒
【預(yù)期用途】 豬瘟是由豬瘟病毒(Classical Swine Fever Virus,CSFV)引起的豬的一種高度接觸性、出血性和致死性傳染病,其特征為高熱稽留和微血管壁變性而引起的廣泛出血、壞死、梗塞等,慢性以纖維素壞死性腸炎為特征。
本試劑用于檢測豬血清中豬瘟病毒抗體,可用于豬瘟病毒疫苗免疫效果評價。
【試劑盒組成】
序號
名稱
規(guī)格/96T×1
規(guī)格/96T×2
規(guī)格/96T×5
1
酶標(biāo)記物
11ml×1(紅蓋)
11ml×2(紅蓋)
26ml×2(紅蓋)
2
樣品稀釋液
25ml×1(黃蓋)
50ml×1(黃蓋)
125ml×1(透明)
3
20X濃縮洗滌液
40ml×1(白蓋)
40ml×1(白蓋)
200ml×1(透明)
4
底物顯色液
10ml×1(黑蓋)
10ml×2(棕蓋)
25ml×2(黑蓋)
5
終止液
5ml×1(黃蓋)
10ml×1(黃蓋)
25ml×1(黃蓋)
6
陽性對照
1.0 ml×1(紅蓋)
1.5 ml×1(紅蓋)
2.0 ml×1(紅蓋)
7
陰性對照
1.0 ml×1(綠蓋)
1.5 ml×1(綠蓋)
2.0 ml×1(綠蓋)
8
酶標(biāo)板
96T×1
96T×2
96T×5
9
蓋板膜
1
2
5
10
自封袋
1
1
2
11
說明書
1
1
1
12
稀釋板
1
2
5
【儲存及有效期】 2~8℃保存,有效期12個月。
包被板開封后請于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限為2個月。
【適用儀器】 含630nm波長的酶標(biāo)儀,37℃恒溫設(shè)備,可調(diào)微量移液器。
【樣品準(zhǔn)備】
1.取動物全血,待血液凝固后,以4000r/min 離心10分鐘,收集血清;或待血液凝固后自然析出血清,再收集血清。血清應(yīng)清亮,無溶血。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按1:1稀釋(如100μl血清加入100μl樣品稀釋液中,混勻)。陰、陽性對照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液),如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶加熱使其溶解后再使用。
溫馨提示:先使用血清稀釋板稀釋完所有的待檢血清、再將稀釋好的血清轉(zhuǎn)移到抗原包被板上,使反應(yīng)時間一致。
【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條,設(shè)陰性、陽性對照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存,每孔加入工作洗滌液 300μl,無需靜置,甩掉板孔中的洗滌液,重復(fù)洗滌2次,最后一次拍干。
3.陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
4.混勻,蓋好蓋板膜,置37℃(推薦水浴)避光反應(yīng)2小時。
5.甩去孔內(nèi)液體,每孔加300μl工作洗滌液,無需靜置,甩掉板孔中的洗滌液,重復(fù)洗滌5次,最后一次拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應(yīng)30分鐘。
7.洗滌,同步驟5。
8.每孔加入底物顯色液100μl,置室溫( 20~25℃)避光反應(yīng)10分鐘。
9.每孔加入終止液50μl,混勻,10分鐘內(nèi)于630nm測定各孔吸光值。
【參考值】 實驗正常的情況下,陰性對照的平均OD值即ODNC應(yīng)≥0.6,陽性對照的平均OD值即ODPC應(yīng)≤0.5。
【檢驗結(jié)果的判定】
1.PI(阻斷率)=(1- 陰性對照平均A值(樣本A值))×100%。
2.PI≥40%為陽性;PI<40%為陰性。
3.本實驗結(jié)果為陰性時表明豬只抗體水平不足,建議補(bǔ)打相應(yīng)疫苗。
【試驗方法的局限性】
該試驗僅作為定性檢測豬血清、血漿中豬瘟病毒抗體,根據(jù)PI值高低可作抗體水平強(qiáng)、中、弱的粗略評估。
【注意事項】
1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣,嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度,各種實驗廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性,應(yīng)避免接觸皮膚和衣物,如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.若試劑盒陰陽性對照、酶標(biāo)記物出現(xiàn)少量懸浮物,屬于正?,F(xiàn)象。
4.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋,未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
5.濃縮洗滌液在低溫時容易結(jié)晶,使用時需恢復(fù)至室溫以完全溶解。
6.洗滌時各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈。
7.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。
8.試驗結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
9.不同批號試劑組分不得混用。
商家暫時不對外公布