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上海雅吉生物科技有限公司

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可滴定酸(TA)檢測(cè)試劑盒(滴定法)
發(fā)布日期:2024/12/3 9:21:56發(fā)布人:上海雅吉生物科技有限公司

 

可滴定酸(TA)檢測(cè)試劑盒(滴定法)

 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

有機(jī)酸存在于多種生命體中,植物組織或果實(shí)中有機(jī)酸種類和數(shù)量因植物組織或果實(shí)種類和品種而異,進(jìn)而影響果實(shí)的口味、酸糖比、耐儲(chǔ)性,植物組織或果實(shí)中含有蘋果酸、檸檬酸、酒石酸、草酸等多種有機(jī)酸。

雅吉生物可滴定酸(TA)檢測(cè)試劑盒(滴定法)又稱有機(jī)酸檢測(cè)試劑盒,檢測(cè)原理是根據(jù)酸堿中和原理進(jìn)行的,即用已知濃度的氫氧化鈉溶液滴定待測(cè)樣品,根據(jù)氫氧化鈉的消耗量計(jì)算待測(cè)樣品中可滴定酸的含量,主要用于定量檢測(cè)植物組織或果實(shí)中可滴定酸(如蘋果酸、檸檬酸、酒石酸、草酸等)的含量,該50T試劑盒可以檢測(cè)約47~48次樣本。

該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,不適用于臨床診斷或其他用途。

 

 

產(chǎn)品組成:

名稱

50T

Storage

試劑(A):TA Lysis Buffer(10×)

250ml

RT

試劑(B):TA 滴定液(0.1mol/L)

2×250ml

RT

試劑(C):TA 標(biāo)定液

120ml

4℃

試劑(D):酚酞指示劑

5ml

RT

 

 

自備材料:

  1. 實(shí)驗(yàn)材料∶桃子、李子、蘋果、杏等果實(shí)或其他植物組織
  2. 研缽或勻漿器、濾紙或紗布
  3. 離心管或試管、三角瓶、滴定管、容量瓶
  4. 水浴鍋、離心機(jī)

5、pH計(jì)、藍(lán)色石蕊試紙

6、滴定分析用蒸餾水(無CO2, NH3 )

 

 

 

 

 

 

 

 

 

操作步驟(僅供參考):

  1. 配制TA Lysis Buffer工作液:取適量的TA Lysis Buffer(10×),

TA Lysis Buffer(10×)︰蒸餾水=1∶9的比例混合,即為TA Lysis Buffer工作液。

2、準(zhǔn)備樣品︰取果實(shí)或其他植物組織,洗凈,擦干,稱取剪碎的新鮮樣品5g,置于研缽或勻漿器,加入10ml TA Lysis Buffer 工作液,充分研磨或勻漿后轉(zhuǎn)入三角瓶,用少量TA Lysis Buffer工作液沖洗研缽或勻漿器,一并轉(zhuǎn)入三角瓶,補(bǔ)加TA Lysis Buffer工作液約30ml ,混勻,(置于80℃恒溫水浴鍋)靜置浸提30min,期間攪拌數(shù)次。(冷卻后)用濾紙或紗布過濾(也可4000r/min離心10min),留取濾液(或上清液)轉(zhuǎn)入50ml容量瓶中,用TA Lysis Buffer 工作液沖洗殘?jiān)?~3次,合并濾液并定容至50ml,充分混勻,即為可滴定酸提取液,4℃保存待用。

3、標(biāo)定TA滴定液:取20ml TA標(biāo)定液,滴加5OμL酚酞指示劑,用TA滴定液(0.1 mol/L)滴定至溶液呈粉紅色;按如下公式計(jì)算TA滴定液準(zhǔn)確濃度:

TA滴定液準(zhǔn)確濃度(nb ,mol/L)=0.24/(TA滴定液所用毫升數(shù)×0.2042)

4、滴定測(cè)定∶取10ml可滴定酸提取液加至三角瓶,滴加50μL酚酞指示劑,用已經(jīng)標(biāo)定好的TA滴定液進(jìn)行滴定至溶液初現(xiàn)粉紅色并在0.5min內(nèi)不褪色為終點(diǎn),記錄TA滴定液的用量;以TA Lysis Buffer工作液代替可滴定酸提取液進(jìn)行滴定,作為空白對(duì)照。

 

 

計(jì)算︰

根據(jù)TA滴定液消耗量,計(jì)算樣品中可滴定酸含量,以百分比表示。

計(jì)算公式如下

可滴定酸含量(%)={V×nb×f×(V1-V0)×100%}/(W×VS)

100g 樣品鮮重中可滴定酸含量(g/100g)={V×nb×f×(V1-V0)×100}/(W×VS)

式中:

V=樣品提取液的總體積(ml)

nb=標(biāo)定后的TA滴定液摩爾濃度(mol/L= mmol/mL)

V1=滴定提取液所用的TA滴定液的體積(ml)

V0=滴定蒸餾水所用的TA滴定液的體積(ml)

W=樣品鮮重(g)

VS=滴定時(shí)所取濾液(可滴定酸提取液)的體積(ml),

本實(shí)驗(yàn)中VS=10ml

f=折算系數(shù)(1mmol TA滴定液換算為有機(jī)酸克數(shù)的系數(shù),g/mmol)

 

 

 

 

 

 

幾種常見有機(jī)酸的換算系數(shù)

有機(jī)酸名稱

換算系數(shù)

常見果蔬和制品

蘋果酸

0.067

蘋果、梨、桃杏李、番茄、萵苣等仁果類、核果類水果

檸檬水(一水)

0.070

柑橘類、漿果類水果

酒石酸

0.075

葡萄

草酸

0.045

菠菜

乳酸

0.090

鹽漬、乳酸發(fā)酵制品

乙酸

0.060

醋漬制品

 

 

注意事項(xiàng):

1、實(shí)驗(yàn)材料應(yīng)盡量新鮮,如取材后不立即使用,應(yīng)存于-20°C.

2、實(shí)驗(yàn)用蒸餾水不能含有二氧化碳,可用新煮沸且冷卻后的蒸餾水,并蓋緊口。

3、TA滴定液為堿性溶液,有腐蝕性,請(qǐng)小心操作。

4、TA標(biāo)定液容易長(zhǎng)菌,宜4℃保存,一旦發(fā)現(xiàn)有絮狀物請(qǐng)棄用。

5、果實(shí)中含酸量較少時(shí)可將TA滴定液適當(dāng)稀釋后使用,可考慮用0.01~0.05M  TA滴定液進(jìn)行滴定。

6、TA滴定液含量計(jì)算公式中,V0最好為3次空白測(cè)定的平均值。

7、如果所測(cè)樣品的濃度過高,應(yīng)用TA Lysis Buffer工作液稀釋樣品后重新測(cè)定,并將稀釋倍數(shù)帶入公式。

8、如果樣品顏色較深,滴定終點(diǎn)不易觀察,應(yīng)采用電位滴定法。

 

 

有效期6個(gè)月有效,4C保存。

 

 

附錄:

如果提取液顏色影響滴定終點(diǎn)的確定,可在藍(lán)色石蕊試紙上加1滴蒸餾水和1滴提取液,當(dāng)試紙不再變紅時(shí)為終點(diǎn);除此之外還可用pH計(jì)測(cè)定,以避免提取液顏色對(duì)確定終點(diǎn)的影響;其方法如下∶將pH計(jì)的電極進(jìn)入提取液中,邊攪拌邊滴加TA滴定液,記錄pH的變化,以滴加滴定液的體積為橫坐標(biāo),pH為縱坐標(biāo),制作酸堿滴定曲線,滴定曲線的兩個(gè)“滴定拐點(diǎn)”間的中點(diǎn)即為滴定終點(diǎn)。

有些果蔬樣品提取液滴定至近終點(diǎn)時(shí)出現(xiàn)黃褐色,這時(shí)可加入提取液體積的1~2倍熱水稀釋,加入酚酞指示劑0.5~1ml,再繼續(xù)滴定,使酚酞變色易于觀察。

 

 

 

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