松弛pHOT-1是一種適用于測定DNA旋轉(zhuǎn)酶超螺旋活性的DNA質(zhì)粒。它也可用于測定DNA連接數(shù)的變化，以評估插層。使用高純度topo I弛豫反應(yīng)制備質(zhì)粒，然后對弛豫產(chǎn)物進(jìn)行滅活和再純化。TopoGEN隨后驗(yàn)證每批的松弛狀態(tài)，并驗(yàn)證底物可以被大腸桿菌DNA旋轉(zhuǎn)酶和金黃色葡萄球菌DNA旋轉(zhuǎn)酶超螺旋化。
這種質(zhì)粒非常適合檢測任何拓?fù)洚悩?gòu)酶。pHOT-1相對較?。?lt;3KB），非常適合展示中間態(tài)拓?fù)洚悩?gòu)體。由于所有拓?fù)洚悩?gòu)酶都表現(xiàn)出簡并的DNA結(jié)合和切割序列，pHOT-1將有效地支持廣泛的拓?fù)洚悩?gòu)酶活性。超螺旋pHOT-1是pBR322的縮小衍生物，優(yōu)化以獲得更高的產(chǎn)量。對于希望評估人類拓?fù)洚悩?gòu)酶I在單一序列上的切割的研究者，它還有一個(gè)額外的特性：我們包含了人類拓?fù)洚悩?gòu)酶I的首選結(jié)合位點(diǎn)（由Westergaard及其同事描述的十六核苷酸序列，見Bonven等人，1985年），該序列源自四膜蟲核糖體基因重復(fù)序列。這個(gè)構(gòu)建作為拓?fù)洚悩?gòu)酶I切割底物非常有用，因?yàn)樵跊]有喜樹堿的情況下，酶在十六核苷酸位點(diǎn)有效切割。這允許研究者嚴(yán)格評估新的潛在拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑，因?yàn)閱我槐尘扒懈钍莾?nèi)置的對照；如果該劑刺激在包含十六核苷酸位點(diǎn)的片段的這個(gè)和/或任何其他序列的切割，明顯的切割很容易被揭示出來。通常，很難在DNA上捕獲拓?fù)洚悩?gòu)酶I切割；必須使用更多的酶，因?yàn)榍懈顝?fù)合物會(huì)消耗酶的化學(xué)計(jì)量。由于這個(gè)原因，分析DNA切割需要更高水平的酶。該片段可以從多克隆位點(diǎn)使用下面顯示的位點(diǎn)分離出來（Maniatis克隆書中的協(xié)議），末端標(biāo)記并用作切割底物。
艾美捷TopoGEN松弛的pHOT-1質(zhì)粒DNA底物：
編號：TG2035
分類：DNA底物
標(biāo)簽：dna底物，pHOT1，松弛DNA底物，松弛pHOT1
存儲(chǔ)緩沖液：所有DNA都存儲(chǔ)在TE緩沖液（10 mM Tris-Cl（pH 7.5），1 MM EDTA）中，濃度如上右上角指定。
存儲(chǔ)和運(yùn)輸條件：這些DNA應(yīng)存儲(chǔ)在4°C下。DNA在常溫下運(yùn)輸（或可能與酶運(yùn)輸一起在干冰上運(yùn)輸）。
質(zhì)量控制分析：
•使用A260/A280比率法光譜測定純度。在最適Gyrase活性條件下孵育，未導(dǎo)致任何可檢測的DNA轉(zhuǎn)化為缺口或線性DNA形式。
•對于超螺旋和松弛的DNA底物，超過85%的DNA將呈超螺旋（形式I）DNA，其余為缺口開放環(huán)狀（形式II）DNA。沒有可檢測的線性DNA形式。
松弛的pHOT-1質(zhì)粒DNA底物相關(guān)產(chǎn)品：
KinetoplastDNA(kDNA)
Supercoiled pHOT-1Plasmid DNA Substrate
Decatenated kDNA
艾美捷科技是TopoGEN的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。
https://www.amyjet.com/brand/TopoGEN.shtml