本周為大家?guī)淼奈墨I為發(fā)表于Hum Vaccin Immunother. (IF: 4.8)的” Recombinant BCG vaccine expressing multistage antigens of Mycobacterium tuberculosis provides long-term immunity against tuberculosis in BALB/c mice”。本文使用了LabEx提供的Luminex檢測服務(wù)。
幾千年來，結(jié)核病一直威脅著世界人類。盡管唯一獲批使用的結(jié)核病疫苗卡介苗已在全球廣泛使用了幾十年，但結(jié)核病的流行仍帶來了挑戰(zhàn)。設(shè)計新型結(jié)核病疫苗的方法有多種，包括亞單位疫苗、減毒活疫苗和重組卡介苗。然而，它們都無法取代卡介苗。該研究中，研究者構(gòu)建了表達由 ESAT-6、CFP-10 和潛伏抗原 DnaK 表位富集區(qū)組成的融合蛋白的 rBCG-ECD003。我們通過測定 BALB/c 小鼠的多種細胞因子分泌能力、多功能 CD4+T 細胞亞群和體液免疫反應(yīng)來評估其免疫原性。此外，我們還驗證了 rBCG-ECD003 對小鼠體內(nèi) Mtb 生長的體外療效及其安全性?？傊芯拷Y(jié)果表明 rBCG-ECD003 有可能提高卡介苗的長期有效性。
LabEx提供的Luminex檢測服務(wù)：
在多重細胞因子檢測中，將脾臟淋巴細胞懸浮液以 1 × 105 個細胞/孔的比例接種到 96 孔 U 型底平板中，分別用 10 μg/ 孔的 PPD、ECD003 和作為陰性對照的培養(yǎng)基刺激。在 37°C 孵育 24 小時后，用 400 g 離心機離心 5 分鐘，收集上清液。按照制造商的說明（LabEx），用 Luminex 多重細胞因子檢測法檢測細胞因子的產(chǎn)生，包括 IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-12、IL-4、IL-10、IL-6、IL-17 和 GM-CSF。
為了研究小鼠接種 rBCG-ECD003 疫苗后的綜合免疫力，我們比較了第 4 周和第 12 周 9 種細胞因子的產(chǎn)生情況。不出所料，除 TNF-α 外，PBS 組的主要測試細胞因子產(chǎn)量在各組中保持在最低水平。
用 rBCG-ECD003 免疫 BALB/c 小鼠脾臟淋巴細胞的細胞因子產(chǎn)生情況。
重要發(fā)現(xiàn)：
本研究評估了表達特定抗原ESAT-6、CFP-10和nDnaK的重組卡介苗（rBCG-ECD003）在免疫BALB/c小鼠后不同時間點的免疫效果。
結(jié)果顯示，與親代卡介苗相比，rBCG-ECD003 能誘導(dǎo)多種 Th1 細胞因子分泌，包括 IFN-γ、TNF-α、IL-2 和 IL-12。
在 PPD 或 ECD003 的作用下，rBCG-ECD003 免疫可顯著增加 IL-2+ 和 IFN-γ+IL-2+ CD4+T 細胞的比例。
rBCG-ECD003 能誘導(dǎo)更強的長期體液免疫反應(yīng)，而不影響親代卡介苗的安全性。
通過體外保護效力試驗，rBCG-ECD003 顯示出更強的長期抑制 Mtb 生長的能力。
rBCG-ECD003 的這些特點表明它具有長期保護作用，并有望控制 Mtb 感染。
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基因水平：PCR Array、RT-PCR、PCR、單細胞測序
蛋白水平：MSD、Luminex、CBA、Elispot、Antibody Array、ELISA、Sengenics
細胞水平：細胞染色、細胞分選、細胞培養(yǎng)、細胞功能
組織水平：空間多組學、多重熒光免疫組化、免疫組化、免疫熒光
數(shù)據(jù)分析：流式數(shù)據(jù)分析、組化數(shù)據(jù)分析、多因子數(shù)據(jù)分析
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