本周為大家?guī)淼奈墨I(xiàn)為發(fā)表于Int Immunopharmacol. (IF: 5.6)的” Acupuncture at ST36 ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis via affecting the function of B cells”。本文使用了LabEx提供的MSD檢測(cè)服務(wù)。
多發(fā)性硬化癥（MS）是一種以中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）的白質(zhì)和灰質(zhì)發(fā)生炎性脫髓鞘為特征的自身免疫性疾病。全世界有250多萬人患有這種疾病，其中大多數(shù)人的年齡在20-40歲之間。然而，多發(fā)性硬化癥的治療目前僅限于對(duì)癥治療，包括糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑和B細(xì)胞缺失療法。
隨著補(bǔ)充和替代醫(yī)學(xué)療法的發(fā)展，其對(duì)許多疾病的治療效果已得到證實(shí)。其中，針灸作為一種常用的治療方法，在多發(fā)性硬化癥患者中的使用率為7.2 ∼ 21%。針灸對(duì)多發(fā)性硬化癥的療效也已得到臨床證實(shí)，但具體機(jī)制尚不明確。眾所周知，免疫細(xì)胞上存在豐富的神經(jīng)遞質(zhì)受體，如膽堿能受體、腎上腺素能受體（AR）、多巴胺受體、GABA受體等。因此，針灸是否能通過激活交感神經(jīng)系統(tǒng)和調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞功能來治療EAE尚不清楚。本研究發(fā)現(xiàn)，針刺 ST36 可顯著提高脾交感神經(jīng)的興奮性，促進(jìn)外周 B 細(xì)胞和 CD4+T 細(xì)胞向抗炎方向分化。
LabEx提供的MSD檢測(cè)服務(wù)：
樣品在3000g轉(zhuǎn)速下離心10分鐘，收集上清液。將300 µl鏈接劑和200 µl相應(yīng)的生物素標(biāo)記抗體混合均勻，室溫孵育30分鐘。然后向該混合物中加入200 µl終止緩沖液，混勻后室溫孵育30分鐘。然后，在U-plex MSD板上涂抹制備好的抗體（50 µl/孔），室溫下孵育 1小時(shí)。然后從每個(gè)燒瓶中取50 µl至另一個(gè) EP 管中，用稀釋劑稀釋至250 µl為最高濃度點(diǎn)，依次稀釋4倍，并設(shè)7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)和1個(gè)空白。然后吸取60 µl的檢測(cè)抗體，用稀釋劑3稀釋至3 ml，作為檢測(cè)抗體稀釋液。另外，準(zhǔn)備 1*PBS (0.05% Tween-20) 作為洗滌緩沖液和 2* 讀取緩沖液。
為了觀察針灸是否能通過影響上述炎癥過程來緩解EAE，研究者在發(fā)病高峰期通過MSD法檢測(cè)了血清中多種細(xì)胞因子的濃度。我們發(fā)現(xiàn)針灸可以下調(diào)一些促炎細(xì)胞因子（IP-10、MIP-3α、IL-17F、IL-23、IL-33、GM-CSF、IFN-γ、IL-12p70、IL-6和IL-12/IL-23p40），上調(diào)一些抗炎細(xì)胞因子（IL-16、IL-21、IL-10、IL-27p28/IL-30、IL-4、EPO、VEGF-A、IL-5和IL-15）。
MSD 檢測(cè)法用于檢測(cè)血清中細(xì)胞因子的濃度。
重要發(fā)現(xiàn)：
-針刺可延緩EAE的發(fā)生，促進(jìn)外周B細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞向抗炎方向分化。
-用6-OHDA去脾交感神經(jīng)可逆轉(zhuǎn)針灸的作用。
-針刺可激活 CD4+T 和 B 細(xì)胞中的β2-AR-cAMP 信號(hào)通路。
-在 B 細(xì)胞存在的情況下，NE 可促進(jìn) CD4+T 細(xì)胞向抗炎方向分化。
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基因水平：PCR Array、RT-PCR、PCR、單細(xì)胞測(cè)序
蛋白水平：MSD、Luminex、CBA、Elispot、Antibody Array、ELISA、Sengenics
細(xì)胞水平：細(xì)胞染色、細(xì)胞分選、細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞功能
組織水平：空間多組學(xué)、多重?zé)晒饷庖呓M化、免疫組化、免疫熒光
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