磷脂酶C（ Phospholipases C，PLC ）試劑盒說明書
分光光度法50管/48樣
注 意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義：
磷脂酶C（EC 3.1.4.3）是一種水解甘油磷酸酯C3位點(diǎn)甘油磷酸酯鍵的脂類水解酶，廣泛存在于微生物及動植物的組織和細(xì)胞中，在細(xì)胞代謝、細(xì)胞傳遞、生長發(fā)育等方面具有重要作用。
磷脂酶C（ Phospholipases C，PLC ）試劑盒測定原理：
磷脂酶C催化水解NPPC產(chǎn)生對硝基苯酚，在410nm處有特征吸收峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、研缽、超速冷凍離心機(jī)、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制 ：
提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體55mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體25mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體20mL×1瓶，4℃保存。
磷脂酶C（ Phospholipases C，PLC ）試劑盒酶液提取
1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心5min，取全部上清于4℃、100000g離心30min，棄上清，取沉淀溶于1mL試劑一。
2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后于4℃，10000g離心5min，取全部上清于4℃、100000g離心30min，棄上清，取沉淀溶于1mL試劑一。
3. 血清：直接測定。
測定操作
| 空白管 | 測定管 |
樣品（μL） |
| 100 |
試劑一（μL） | 100 |
|
試劑二（μL） | 500 | 500 |
充分混勻，37℃反應(yīng)30min |
試劑三（μL） | 400 | 400 |
充分混勻，于1mL玻璃比色皿，蒸餾水調(diào)零，測定410nm處吸光值，分別記為A空白管和A測定管，△A=A測定管-A空白管。 |
酶活計算公式：
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0191x - 0.0103，R2 = 0.9991
1．按照蛋白濃度計算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個酶活力單位。
PLC活性（nmol/min/mg prot）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T
= 17.45×（△A+0.0103）÷ Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計算
酶活性定義：每克組織每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個酶活力單位。
PLC活性（nmol/min/g 鮮重）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V反總÷(V樣÷V樣總×W) ÷T
= 17.45×（△A+0.0103）÷ W
3．按照細(xì)胞數(shù)量計算
酶活性定義：每104個細(xì)胞每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個酶活力單位。
PLC活性（nmol/min/104 cell）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V反總÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量) ÷T
= 17.45×（△A+0.0103）÷ 細(xì)胞數(shù)量
4．按照液體體積計算
酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個酶活力單位。
PLC活性（nmol/min/mL）= （△A+0.0103）÷ 0.0191×V反總÷V樣÷T
= 17.45×（△A+0.0103）
V反總：反應(yīng)總體積，1mL；V樣：加入樣本體積，0.1mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，30
關(guān)鍵字： 磷脂酶C（?Phospholipases;磷脂酶C（?Phospholipases;
上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月，是一家面向生命科學(xué)領(lǐng)域，提供科研類試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)的生物企業(yè)。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)等 。旗下?lián)碛?“雅吉生物”、“晶風(fēng)生物”、“彩佑實(shí)業(yè)”、“GTX” 品牌。通過公司各部門員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度，深得新老客戶厚愛，本著“優(yōu)質(zhì)、服務(wù)、信譽(yù)”的精神，堅持以優(yōu)良的技術(shù)、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽(yù)為國內(nèi)外廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務(wù)。
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本公司鄭重承諾：質(zhì)量保證、供貨及時、服務(wù)周到。