性狀 |
天(門)冬酰胺酶系由微生物發(fā)酵法生產(chǎn)的酶制劑,為白色結(jié)晶性粉末,易溶于水,不溶于乙醇、丙酮、氯仿、乙醛、苯等到有機(jī)溶劑,微有濕性,對(duì)熱穩(wěn)定,在500C下持續(xù)15min,活力降低30%,600C下不足1h完全失活。凍干品在2~50C可穩(wěn)定數(shù)月。但其溶液只能保存數(shù)日,200C貯存7天。50C貯存14天均不減少酶的活力。最適ph為8.5,最適溫度370C。本品是一種對(duì)種瘤細(xì)胞具有選擇性抑制作用的藥物。對(duì)實(shí)體瘤和白血病均有效,且與常用的巰嘌呤、長(zhǎng)春新堿、阿糖胞苷、甲氨喋呤等無交叉耐藥現(xiàn)象。 |
所屬類別 |
生物化學(xué)品: 酶類: 治療用酶 |
用途與作用 |
(天)門冬酰胺酶為抗腫瘤酶制劑。對(duì)急性粒細(xì)胞型白血病和急性單核細(xì)胞白血病有一定療效。對(duì)惡性淋巴瘤療效也較好,對(duì)急性淋巴細(xì)飽白血病緩解率在50%以上,對(duì)于常用藥物治療后復(fù)發(fā)的病例也有效,但是單獨(dú)使用不僅緩解期短,且易產(chǎn)生耐藥性。對(duì)機(jī)體免疫尚有抑制作用。但是腸桿菌(天)門冬酰胺酶含內(nèi)毒素,可引起發(fā)熱、食欲減退、惡心、嘔吐、腹瀉,有的病人頭痛、頭昏、嗜睡、精神錯(cuò)亂等,有的病人有血漿蛋白低下,血脂質(zhì)過高或過低,氮質(zhì)血癥和肝功能損傷,有的病人有骨髓抑制,血小板和白細(xì)胞下降。有的病人脫發(fā)、蛋白尿、胰腺炎。用前必須先做皮試,以免引起過敏反應(yīng),有過敏史病人應(yīng)十分小心或不用。不同藥廠、不同批號(hào)的產(chǎn)品其純度和過敏反應(yīng)均有差異,使用時(shí)要慎重。有致畸胎作用、妊娠早期禁用。肝腎功能嚴(yán)重?fù)p害者忌用。 可用于靜注、靜滴、肌注和鞘內(nèi)注射。一般劑量:20~5000U/kg,或10000~15000U/m%<2,每周3~7次。從每日500~1000U/kg,較佳。亦可每周應(yīng)用一次,每次25000U/kg.一般以3~4周為一療程.總劑量應(yīng)根據(jù)所用藥物的純度和毒性而定,靜注以生理鹽水20~40ml稀釋,靜滴以5%葡萄糖液或0.9%氯化鈉注射液500ml稀釋. |
合成工藝與制法 |
菌種培養(yǎng)采取大腸桿菌Escherichia Coli A.S.1.357,牛肉汁培養(yǎng)基100ml,蛋白胨1g,氯化鈉0.5g和瓊脂2~2.5g,在370C下,試管培養(yǎng)24h,茄瓶培養(yǎng)8h ,錐瓶培養(yǎng)16h。 大腸桿菌肉湯培養(yǎng)基;370C;2d→菌種培養(yǎng)肉湯菌種 種子培養(yǎng)培養(yǎng)基用10%的玉米漿接種量1%~1.5%,在370C下,通氣攪拌培養(yǎng)6~8h。 肉湯菌種玉米漿;370C;6h→種子培養(yǎng)種子菌種 發(fā)酵罐培養(yǎng)取10%玉米漿接種量8%,在370C下,通氣攪拌培養(yǎng)6~8h,離心,分離發(fā)酵液,得菌體,攪拌下加入2倍發(fā)酵液量的丙酮,壓濾,濾餅過篩,自然風(fēng)干成菌體干粉。 種子菌種玉米漿; 370C;7h→發(fā)酵罐培養(yǎng)發(fā)酵液丙酮→壓濾,風(fēng)干干菌體 提取、沉淀每千克菌體干粉加入pH8的硼酸緩沖液(0.01mol/L)10L,在攪拌下370C保溫1.5h后,降溫到300C左或,用乙酸溶液(5mol/L) 調(diào)節(jié)pH4.2~4.4,壓濾,加入2倍于濾液體積的丙酮,靜置3~4h,待沉淀完全,過濾,收集沉淀,晾干,即得干粗酶。 干菌體硼酸緩沖液;pH8;370C→提取提取液HAc;pH4.3→沉淀干粗酶 熱處理取粗制酶1g 加入20ml 甘氨酸溶液(3g/L即0.3g),調(diào)節(jié)pH8.8,攪拌1.5h,離心,收集上清液,加熱到600C,熱處理30min。離心棄去沉淀,上清液加2倍體積的丙酮,析出沉淀,離心,收集酶沉淀,加pH8磷酸緩沖液(0.01mol/L),再離心棄去不溶物,得上清酶沉液。 干粗酶甘氨酸;600;30min→熱處理酶溶液 精制、凍干調(diào)節(jié)pH8.8酶溶液,離心棄支沉淀,上清液再調(diào)pH7.7,在上清液中加聚乙二醇(500g/L即50%),使聚乙二醇的濃度達(dá)到160g/L(16%),在溫度2~50C時(shí),放置4~5d,有沉淀析出,離心分離沉淀。加蒸餾水使之溶解,加4倍溶液量的丙酮,沉淀,同法重復(fù)1次,沉淀用pH6.4磷酸緩沖液(0.05mol/L)溶解,得精制酶溶液。調(diào)節(jié)pH至5~5.2,再加聚乙二醇(500g/L),如此重復(fù)處理1次。再調(diào)pH7.7,加聚乙二醇(500 g/L)溶解,在無菌條件下用6號(hào)垂熔漏斗過濾,分裝,冷凍干燥,即得注射用(天)門冬酰胺酶成品,每支10000U或20000U。 酶溶液聚乙醇;不同pH處理→精制無熱原酶液 無菌分裝→凍干(天)門冬酰胺酶凍干制劑 |
參考質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) |
中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)二部第六冊(cè)(生化藥品第一分冊(cè))13頁(yè) | 指標(biāo)名稱 | 指標(biāo) | 效價(jià) | 每毫克蛋白含(天)冬酰胺酶效價(jià)≥250單位 |
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