背景[1-6]
STAT1 alpha Rabbit Monoclonal Antibody（STAT1α家兔單克隆抗體）是用STAT1抗原對家兔進行免疫后篩選出只產生的STAT1抗體的B淋巴細胞，再將B細胞通過細胞融合技術與骨髓瘤雜交然后篩選出只分泌STAT1抗體的雜交細胞，最后通過層析柱純化制的高純度的STAT1抗體兔單克隆抗體。STAT（Signal transducers and activators of transcription）(信號傳導及轉錄激活因子),含有SH2和SH3結構域，可與特定的含磷酸化酪氨酸的肽段結合。
當STAT被磷酸化后，發(fā)生聚合成為同源或異源二聚體形式的活化的轉錄激活因子，進入胞核內與靶基因啟動子序列的特定位點結合，促進其轉錄。已克隆成功4種JAK(JAK13和Tyk2)與7種STAT(STAT1，STAT2，STAT3，STAT4，STAT5a，STAT5b，STAT6)。
STAT1膜受體信號通過各種配體，包括干擾素和生長激素，如EGF，誘導激活JAK激酶，然后導致酪氨酸磷酸化的各種轉錄因子的統計。Stat1和Stat2 IFN-α和形成的異質二聚體ISGF3轉錄因子復雜的一部分。雖然早期報告顯示Stat3激活通過EGF和il-6,它已經表明,Stat3β似乎都被激活而Stat3α是由表皮生長因子激活的,但不是由il-6。Stat4的最高表達見于睪丸和髓樣細胞。IL-12被認為是Stat4的激活因子。Stat5被催乳素和IL-3激活。Stat6參與IL-4激活的信號通路。
STAT1同源二聚體參與Ⅱ型干擾素（Interferon-gamma）引發(fā)的信號通路，進入細胞核后會結合到啟動子上的干擾素γ激活序列（Interferon-gamma activated sequence，GAS），激活IFN誘導的早期基因表達。在Ⅰ型干擾素（interferon alpha/beta）激活的信號通路，STAT1-STAT2異源二聚體與IRF9（interferon response factor 9）結合形成ISGF3（interferon stimulated gene factor 3）復合物，并結合到啟動子的ISRE結合區(qū)，誘導下游基因表達。IFNγ是唯一一種II型干擾素，主要由活化的T淋巴細胞和自然殺傷細胞產生，具有抗病毒、免疫監(jiān)視、免疫調節(jié)及抗腫瘤等特性。
IFNγ的生物學活性依賴于細胞內分子信號轉導網絡的激活，目前JAK-STAT信號轉導通路最為廣泛研究和認可。首先IFNγ與細胞表面的IFNγ受體(IFNGR1和IFNGR2)相結合，使得胞內與IFNGR2相連JAK2激酶發(fā)生自磷酸化，激活的JAK2磷酸化JAK1激酶，接著JAK1磷酸化IFNGR1440位酪氨酸，使其產生STAT1蛋白的錨定位點，被募集的STAT1蛋白701位酪氨酸被磷酸化，目前認為可能是被JAK2介導，同時STAT1Ser727在IFNγ信號轉導中也會被磷酸化，活化的STAT1蛋白形成同源二聚體，與受體解聚，進入細胞核內，結合含有gamma激活序列(GAS)的基因啟動子，啟動IFNγ效應基因的表達，從而發(fā)揮其抗病毒生物學活性。
應用[7][8]
STAT1α家兔單克隆抗體可用于c-Abl通過磷酸化STAT1調控IFNγ應答途徑研究：
非受體酪氨酸激酶c-abl基因位于人的第9號染色體，是Abelson小鼠白血病病毒原癌基因v-abl在細胞內的同源基因，編碼蛋白分子量約為140kDa。c-Abl定位于多種亞細胞結構中，能夠被多種應激信號活化，通過其酪氨酸激酶活性參與調控細胞增殖、骨架重塑、細胞黏附、氧化和DNA損傷應激、細胞凋亡、細胞轉化以及細胞遷移等生命活動，發(fā)揮重要的生理功能。
首先利用熒光定量PCR驗證轉錄組數據，結果顯示c-Abl敲低細胞中免疫蛋白酶體誘導亞基Lmp2和調節(jié)亞基PA28α的IFNγ誘導轉錄水平低于野生型細胞，并且抗原提呈相關轉運體Tap1本底轉錄水平也出現下調。Lmp2和Tap1基因共用一個雙向轉錄啟動子，而且兩個基因的轉錄均受到IFNγ調控，因此我們構建Lmp2轉錄啟動子熒光素酶報告系統，突變其中已知轉錄調控序列，結果顯示，c-Abl是通過GAS序列調控Lmp2基因轉錄。
GAS轉錄活性由IFNγ經典信號轉導通路JAK-STAT1中的關鍵因子STAT1調控，因此，提示我們c-Abl可能通過調控STAT1蛋白影響IFNγ效應基因表達。利用免疫共沉淀方法證明細胞內源性和過表達c-Abl與STAT1能夠形成免疫復合物，GST-pull down和Far Western結果表明c-Abl與STAT1是直接相互作用，而且c-Abl通過其SH2結構域與STAT1C端結合，利用細胞原位檢測蛋白質相互作用的技術Duo-Link發(fā)現IFNγ能夠增強c-Abl與STAT1的相互作用，并且具有IFNγ劑量依賴性。
進一步研究發(fā)現，IFNγ誘導c-Abl缺陷細胞中STAT1已知關鍵氨基酸位點Tyr701和Ser727磷酸化水平顯著弱于野生型細胞，這兩個位點的磷酸化修飾對于STAT1蛋白的信號轉導和轉錄激活活性至關重要；通過過表達和體外激酶分析證明c-Abl能夠特異性磷酸化STAT1，并且質譜數據結果表明c-Abl介導STAT1Tyr701磷酸化；利用JAK2缺陷型細胞和JAK1/2激酶抑制劑證明c-Abl磷酸化STAT1不依賴于JAK激酶，并且c-Abl能夠促進STAT1蛋白表達水平，調控其同源二聚體的形成及進入細胞核。
參考文獻
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[8]崔艷.c-Abl通過磷酸化STAT1調控IFNγ應答途徑[D].中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院,2012.