背景及概述^[1]

細胞低溫凍存液又叫細胞凍存液。目前細胞的低溫保存需要添加冷凍保護劑，如果直接冷凍細胞內(nèi)會產(chǎn)生冰晶對細胞造成傷害從而導致細胞死亡。冷凍保護劑包括滲透性冷凍保護劑和非滲透性冷凍保護劑，其中，滲透性冷凍保護劑對細胞凍存起到重要的作用，包括二甲基亞砜(DMSO)、甘油、乙二醇、丙二醇、甲醇、乙醇、丙醇、和甲酰胺等。

滲透型冷凍保護劑能夠穿過細胞膜滲透到細胞內(nèi)，其中最常用的就是DMSO，DMSO能夠滲透到細胞內(nèi)增大胞內(nèi)滲透壓，降低冰點，延緩凍存過程。但是DMSO對細胞存在一定的毒性，在一些臨床治療案例中，注射了含有DMSO的細胞的病人表現(xiàn)出惡心、頭痛、高血壓和腹部絞痛等癥狀。因此，對于臨床治療的細胞應該盡量減少DMSO的用量，或?qū)⑵涮鎿Q為一種更安全的冷凍保護劑。

目前已經(jīng)有一些公司生產(chǎn)出不含DMSO成分的凍存液，例如，日本全藥工業(yè)株式會社生產(chǎn)的GMP級無血清無DMSO的細胞凍存液，其冷凍保護劑為1，2--丙二醇，雖然毒性較低，但制造商研制過程中從未用它測試過治療用的細胞類型。

專利EP2305792A公開的技術(shù)使用了不含動物源成分、不含DMSO的細胞凍存液，使用安全無毒的琥珀酰-ε-多聚賴氨酸作為冷凍保護劑替代有毒的DMSO，沒有引入任何動物源性物質(zhì)，減少了污染的幾率。但是其所公開的細胞凍存液在長時間保存細胞時對細胞造成一定程度的損傷，細胞存活率有待進一步提高。

簡介^[1]

CN201811072202.1提供一種細胞凍存液，實現(xiàn)細胞凍存液的安全無毒、進一步提高細胞存活率。本發(fā)明的所述細胞凍存液，包含酰基化ε-多聚賴氨酸、多元醇和平衡緩沖液。本發(fā)明所述細胞凍存液，其有益效果在于：所述細胞凍存液包含?；?epsilon;-多聚賴氨酸和多元醇，替代了有毒性的DMSO作為冷凍保護劑，穩(wěn)定性好，無毒副作用，與已有的琥珀酰-ε-多聚賴氨酸凍存液相比，添加所述多元醇，能夠進一步減小凍存復蘇過程中對細胞的損傷，提高細胞存活率。

使用所述細胞凍存液進行細胞凍存復蘇的方法，包含以下步驟：

S1:取待凍存細胞懸液，離心收集細胞，用所述細胞凍存液重懸細胞并調(diào)整細胞濃度，獲得細胞懸液；

S2:吸取所述細胞懸液分裝于凍存管或凍存袋中，然后將所述凍存管或凍存袋凍存；

S3:取出所述凍存管或凍存袋，在30-40℃的條件下對所述凍存管或凍存袋進行解凍處理，得到復蘇后的細胞。

主要參考資料

[1] CN201811072202.1 細胞凍存液、凍存復蘇方法及其應用