背景^[1-6]

HA抗體(小鼠單抗)是高純度的小鼠單克隆抗體，屬IgG2b同型，免疫原為人工合成的HA標簽多肽序列(YPYDVPDYA)。該抗體能高度特異識別重組蛋白C末端、N末端或內(nèi)部的HA標簽(YPYDVPDYA)，適用于定性或定量檢測HA融合表達蛋白。

ha標簽系統(tǒng)利用一個ha(流感病毒血凝素，influenza hemagglutinin epitope:ypydvpdya)短肽肽融合到目標蛋白。ha標簽可位于蛋白質(zhì)的c端或n端，該系統(tǒng)已廣泛應用于多種細胞類型，相應的ha標簽抗體也被廣泛應用。ha標簽抗體能特異識別c末端或n末端帶有ha標簽(ha-tagged)的融合蛋白，可可以用于檢測和ha tag融合表達蛋白的表達、細胞內(nèi)定位，以及純化、定性或定量檢測ha tag融合表達蛋白等。

HA抗體(小鼠單抗)用經(jīng)過適當修飾的人工合成human influenza virushemagglutinin(HA)98-106位多肽YPYDVPDYA作為抗原制備而成的抗HA小鼠單克隆抗體。克隆號為HA-7。HA抗體可以用于識別human influenza virus hemagglutinin(HA)，但更為廣泛地用于HA tag融合表達蛋白的檢測?？贵w可以檢測位于融合蛋白N-terminal的HA tag，也可檢測位于融合蛋白C-terminal的HA tag。DNA重組技術(shù)使給目標蛋白帶上特定tag成為可能，這些常用的tag包括myc、HA、Flag、His、GST等。帶上tag后，通常不會影響目標蛋白的生物活性和細胞內(nèi)定位。但檢測和tag融合表達的目標蛋白時，使用商業(yè)化的相應tag抗體就可以完成，大大方便了很多實驗檢測。

應用^[7][8]

HA抗體可以用于檢測和HA tag融合表達蛋白的表達、細胞內(nèi)定位，以及純化、定性或定量檢測HAtag融合表達蛋白等。

在抗禽流感病毒（AIV）血凝素（HA）單克隆抗體雜交瘤細胞株建立的研究中將低致病性H9N2亞型和H5N2亞型禽流感病毒經(jīng)著速離心和蔗糖密度梯度離心純化后，免疫Balb/c小鼠，應用淋巴細胞雜交瘤技術(shù)，通過ELISA和HI篩選，建立了抗H5和H9N2亞型禽流感病毒雜交瘤細胞株3E4、2A4，其分泌抗體能力穩(wěn)定，為針對HA蛋白的單抗，3E4分泌的單克隆抗體能與H5N2亞型N28株發(fā)生血凝抑制反應，不與H9N2亞型Hp株發(fā)生反應：2A4與H9N2亞A／雞／河南／A2／99（H9N2）株、A／雞／淇縣／A1／01（H9N2）株、A／雞／淇縣／A1／04（H9N2）株AIV發(fā)生血凝抑制反應，而不與H5N2亞型AIV發(fā)生反應。

兩株單抗與H1N1、H3N2 SIV、NDV、IBDV、EDSV及IBV均無交叉反應，表明該單抗分別具有AIV H5和H9亞型特異性。3E4雜交瘤細胞培養(yǎng)上清和腹水HI效價分別為5、7（log2），ELISA效價分別為6400和12800；2A4雜交瘤細胞培養(yǎng)上清和腹水HI效價為8 log2和16 log2，ELISA效價為12800和256000。這兩株雜交瘤細胞分泌的抗體均有良好的熱穩(wěn)定性。腹水經(jīng)辛酸硫酸銨純化后，蛋白含量分別7.46mg／mL、14.9 mg／mL。

此兩株單克隆抗體的獲得為禽流感病毒快速亞型鑒別檢測方法的建立，以及研究AIV H5亞型和H9亞型血凝素（HA）抗原性分析、變異規(guī)律和變異株的檢測等奠定了基礎。H9N2亞型AIV表面抗原上的具有血凝活性的抗體結(jié)合位點不止一個，3和18毒株的該位點已經(jīng)變異或缺失。四株單抗分別做病毒中和試驗。發(fā)現(xiàn)均無中和活性，說明表面抗原上的血凝活性位點并非就是中和活性位點。本試驗的研究結(jié)果進一步證實了H9N2亞型AIV血凝素抗原的變異特性，將為H9N2亞型AIV血凝素表面抗原結(jié)構(gòu)與功能及變異規(guī)律的深入研究以及我國的禽流感H9亞型的流行疫苗株的選擇提供了依據(jù)。

參考文獻

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