背景[1-7]
FITC標(biāo)記山羊抗小鼠IgG(H+L)用純化的小鼠IgG免疫山羊，然后用親和純化柱對獲得的抗血清進行純化，并經(jīng)過人IgG吸附純化的優(yōu)質(zhì)二抗。對人IgG幾乎沒有結(jié)合能力。
FITC（異硫氰酸熒光素）熒光標(biāo)記的抗小鼠二抗與小鼠IgG分子有特異性反應(yīng)，與其它小鼠免疫球蛋白的輕鏈有交叉反應(yīng)。該二抗與血清內(nèi)非免疫球蛋白無交叉反應(yīng)，但可能與其它種屬的免疫球蛋白有交叉反應(yīng)。FITC標(biāo)記山羊抗小鼠IgG(H+L)用于免疫熒光染色時的推薦稀釋比例為1:500。實際實驗操作過程中需根據(jù)抗原和抗體的具體情況適當(dāng)調(diào)節(jié)熒光標(biāo)記二抗的稀釋比例，推薦的調(diào)節(jié)范圍為1:200-1000。
FITC（Fluorescein Isothiocyanate，異硫氰酸熒光素）純品為黃色或橙黃色結(jié)晶粉末，易溶于水和酒精溶劑。FITC分子量為389。4，吸收光波長為490～495nm，發(fā)射光波長為520～530nm，呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光。FITC在冷暗干燥處可保存多年，是目前應(yīng)用最廣泛的熒光素。
由于FITC是小分子化合物，每一個抗體可標(biāo)記幾個FITC分子，IgM通常用小分子的熒光素標(biāo)記，如FITC、Cy3/5、Texas Red等。然而FITC的缺點是淬滅快，因此要和抗淬滅劑一起使用。FITC性質(zhì)穩(wěn)定，能與蛋白質(zhì)結(jié)合，是檢測組織細胞內(nèi)蛋白質(zhì)最常用的熒光探針。它還能標(biāo)記抗體，可用于免疫組織化學(xué)單染或多重染色。FITC熒光二抗主要優(yōu)點是人眼對黃綠色較為敏感，通常切片標(biāo)本中的綠色熒光少于紅色。缺點是在光照下易淬滅，易受自發(fā)熒光影響。
應(yīng)用[8][9]
FITC標(biāo)記山羊抗小鼠IgG(H+L)可用于檢測小鼠IgG亞型種類及含量變化免疫組化實驗：
通過對已獲得的嵌入型蛋白SLP-Multi VP1的氨基酸序列,應(yīng)用在線軟件Swiss-Model和Swiss-Pbd Viewer軟件成功對該蛋白三維結(jié)構(gòu)進行預(yù)測,并標(biāo)注了三型FMDV不同表位的位置。
用已獲得的嵌入型蛋白SLP-Multi VP1與重組蛋白SLP免疫6周齡的昆明小鼠,以PBS作為陰性對照組。小鼠經(jīng)三次免疫后,摘取其脾臟組織分離總淋巴細胞,按既定方法處理并通過流式細胞儀分析各免疫組小鼠CD4+T和CD8+T細胞的變化,試驗結(jié)果顯示:嵌入型蛋白SLP-Multi VP1免疫組的CD4+T與CD8+T數(shù)量高于SLP免疫組及PBS對照組,差異顯著(P<0.05)。該結(jié)果提示嵌入型蛋白SLP-Multi VP1可誘導(dǎo)機體產(chǎn)生免疫反應(yīng)。
將嵌入型蛋白SLP-Multi VP1與重組蛋白SLP免疫6周齡的BALB/c小鼠和昆明小鼠,用間接ELISA方法檢測了三次免疫后各組小鼠的總Ig G水平,試驗結(jié)果顯示,2種小鼠均能產(chǎn)生較高滴度的Ig G(P<0.05),該結(jié)果表明嵌入型蛋白SLP-Multi VP1具有良好的抗原性,并且2種小鼠的Ig G水平差異不顯著(P>0.05),表明不同種小鼠間無差異性。
經(jīng)第三次免疫后,采集BALB/c和昆明小鼠的血清,采用Ig G亞型ELISA試劑盒(e Bioscience公司)進行檢測Ig G1和Ig G2a水平,獲得的實驗數(shù)據(jù)通過SPSS統(tǒng)計學(xué)分析,試驗結(jié)果顯示:在兩種免疫動物小鼠模型中,嵌入型蛋白SLP-Multi VP1組Ig G1和Ig G2a水平均高于SLP免疫組,差異顯著(P<0.05)。另外,在嵌入型蛋白SLP-Multi VP1免疫組中,Ig G2a的水平高于Ig G1,差異顯著(P<0.05)。而在SLP免疫組中,Ig G1和Ig G2a水平差異不顯著(P>0.05),該結(jié)果提示嵌入型蛋白SLP-Multi VP1可能傾向于激發(fā)Th1類免疫應(yīng)答。本試驗對各型FMDV VP1基因表位嵌入型蛋白SLP-Multi VP1免疫特性更深入的研究奠定了基礎(chǔ)。
參考文獻
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