蛋白電泳緩沖液

蛋白電泳緩沖液的種類(lèi)非常多，需要根據(jù)凝膠體系來(lái)進(jìn)行選擇。凝膠系統(tǒng)為 Tris-甘氨酸體系時(shí)，可選擇 Tris-甘氨酸電泳緩沖液，凝膠系統(tǒng)為 Bis-Tris 體系時(shí)，可選擇 MES 或 MOPS 緩沖液，當(dāng)凝膠系統(tǒng)為 Tris-tricine 體系時(shí)，則選擇 Tricine 緩沖液。

并且，蛋白電泳緩沖液分為變性與非變性緩沖液，區(qū)別在于變性緩沖液需加入 SDS （十二烷基硫酸鈉）中和電荷。我們通常研究 WB、IP 時(shí)，使用變性緩沖液研究分子量大小即可，非變性緩沖液常用于研究蛋白空間結(jié)構(gòu)、等電點(diǎn)等。

上樣緩沖液

上樣緩沖液(Loading Buffer)是各類(lèi)實(shí)驗(yàn)不可缺少的，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)類(lèi)型選擇不同的 Buffer，可分為DNA 電泳 Loading Buffer、RNA 電泳 Loading Buffer 以及 SDS-PAGE Loading Buffer 。

SDS電泳緩沖液

10×Tris-醋酸-SDS電泳緩沖液

10×Tris-醋酸-SDS電泳緩沖液是可以用于Tris-醋酸系統(tǒng)蛋白凝膠電泳的電泳緩沖液，用于蛋白變性電泳。本溶液為10×濃縮液，使用前稀釋成1×即用型緩沖液使用。1×即用型Tris-醋酸-SDS電泳緩沖液組份濃度為：50 mM Tris，50 mM Tricine，0.1% SDS，~pH8.2。對(duì)于還原樣品電泳，1×即用型電泳緩沖液要添加400×抗氧化劑后使用；非還原樣品電泳，不需要添加抗氧化劑。

SDS- PAGE電泳緩沖液

SDS-PAGE，十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，是一種可以根據(jù)蛋白質(zhì)的分子量分離樣本中蛋白質(zhì)的技術(shù)。聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺(簡(jiǎn)稱(chēng)Acr)和交聯(lián)劑N，N'-亞甲基雙丙烯酰胺(簡(jiǎn)稱(chēng)Bis)在催化劑過(guò)硫酸銨(APS)，N，N，N'，N’-四甲基乙二胺(TEMED)作用下，聚合交聯(lián)形成的具有網(wǎng)狀立體結(jié)構(gòu)的凝膠，并以此為支持物進(jìn)行電泳。

SDS- PAGE電泳緩沖液適用于Tris-甘氨酸系統(tǒng)的變性聚丙烯酰胺凝膠蛋白電泳，為電泳過(guò)程提供穩(wěn)定的電泳及緩沖環(huán)境，配合不同濃度的分離膠使用，可實(shí)現(xiàn)6-400kDa范圍的蛋白分離。本品為改良產(chǎn)品，在成分選擇和各組分濃度兩方面進(jìn)行了優(yōu)化，可提供更加穩(wěn)定、持久的電泳環(huán)境。針對(duì)常規(guī)非連續(xù)變性聚丙烯酰胺凝膠電泳實(shí)驗(yàn)可至少回收使用5次或累計(jì)電泳時(shí)間至少12小時(shí)。本品為10倍濃縮儲(chǔ)液，使用時(shí)需用三級(jí)水或一級(jí)水進(jìn)行10倍稀釋后使用。

5xTris-Glycine Buffer(SDS- PAGE電泳緩液)的配制

組份濃度：0.125 M Tris，1.25 M Glycine， 0.5% (W/V) SDS；配制量1L

稱(chēng)量15.1 g的Tris，94gGlycine以及5gSDS置于1 L燒杯中。

加入約800ml的去離子水，攪拌溶解。

加去離子水將溶液定容至1 L后，室溫保存。

各組分的主要作用：

Tris-HCl——穩(wěn)定電泳過(guò)程中的pH。pH對(duì)電泳有著至關(guān)重要的影響。

十二烷基硫酸鈉（SDS）——能破壞蛋白分子的二、三級(jí)結(jié)構(gòu)，使分子去折疊，讓所有蛋白質(zhì)分子均勻地帶上負(fù)電荷，在施加電壓的情況下，所有的蛋白質(zhì)都向凝膠的正極遷移，僅根據(jù)蛋白的分子量大小不同而分離，與蛋白的帶電量和結(jié)構(gòu)形狀無(wú)關(guān)。在凝膠中也存在SDS，這是為了確保所有的蛋白質(zhì)在整個(gè)凝膠中保持荷載負(fù)電荷。