背景[1-7]
細胞遷移與侵襲檢測服務(wù)主要利用Transwell小室進行腫瘤細胞遷移的檢測，常用8.0µm膜，上室接種腫瘤細胞，下室加入FBS或某些特定的趨化因子，腫瘤細胞會向營養(yǎng)成分高的下室跑，計數(shù)進入下室的細胞量可反映腫瘤細胞的遷移能力。而對腫瘤細胞侵襲的檢測，則需要預(yù)先用matrigel包被Transwell小室。在聚碳酸酯膜上涂上一層基質(zhì)膠，模仿細胞外基質(zhì)，上室接種腫瘤細胞，下室加入FBS或某些特定的趨化因子，細胞需要分泌某種特定的蛋白質(zhì)，將基質(zhì)消化后才可以從上室遷移到下室，計數(shù)進入下室的細胞量，即可測定細胞的侵襲能力。
腫瘤細胞遷移（migration）與侵襲（invasion）檢測均為能夠間接反映腫瘤遷移或侵襲能力，或特定情況下的遷移或侵襲能力的實驗。通過研究腫瘤細胞的遷移與侵襲能力，能夠為探究腫瘤發(fā)生及轉(zhuǎn)移的機制提供重要的實驗支撐。腫瘤細胞遷移是惡性腫瘤最重要的特征之一，瘤細胞由其原發(fā)部位侵入血管或淋巴管或體腔，部分細胞被血液、淋巴液帶到另一部位或器官，在該處繁殖生長，形成與原發(fā)瘤同樣類型的腫瘤，這一過程即為腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。
目前檢測腫瘤細胞遷移的方法主要有細胞劃痕實驗及Trans-Well小室遷移實驗，傳統(tǒng)的細胞劃痕實驗需要連續(xù)觀測以評估藥物對細胞遷移的作用，因此，其面臨的的問題是不能保證每次觀察的都是同一位點，對結(jié)果不能進行定量分析，也不能區(qū)分劃痕內(nèi)的細胞是遷移還是增殖的而來的。而Trans-Well小室遷移實驗雖能定量檢測細胞遷移的數(shù)量，但不能直觀觀測細胞遷移過程，也不能將遷移和增殖細胞區(qū)分出來，而且其價格昂貴，不適合抗腫瘤細胞遷移藥物的大規(guī)模篩選。
胞遷移與侵襲實驗將Transwell小室放入培養(yǎng)板中，小室內(nèi)稱上室，培養(yǎng)板內(nèi)稱下室，上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酯膜相隔，將研究的細胞種在上室內(nèi)，由于聚碳酸酯膜有通透性，下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內(nèi)的細胞，應(yīng)用不同孔徑和經(jīng)過不同處理的聚碳酸酯膜，就可以進行共培養(yǎng)、細胞趨化、細胞遷移、細胞侵襲等多種方面的研究。
Transwell小室放入培養(yǎng)板中，小室內(nèi)稱上室，培養(yǎng)板內(nèi)稱下室，上室內(nèi)盛裝上層培養(yǎng)液，下室內(nèi)盛裝下層培養(yǎng)液，上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酯膜相隔。我們將細胞種在上室內(nèi)，由于聚碳酸酯膜有通透性，下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內(nèi)的細胞，從而可以研究下層培養(yǎng)液中的成分對細胞生長、運動等的影響。應(yīng)用不同孔徑和經(jīng)過不同處理的聚碳酸酯膜，就可以進行共培養(yǎng)、細胞趨化、細胞遷移、細胞侵襲等多種方面的研究。
應(yīng)用[8][9]
細胞遷移與侵襲檢測服務(wù)可用于研究細胞遷移與侵襲抑制藥物的研究：
LIMK1沉默對DADS抑制SW480細胞遷移與侵襲的影響。方法RNA干擾技術(shù)建立穩(wěn)定LIMK1-miRNA/SW480細胞株;免疫組化和Western blot檢測DADS對沉默LIMK1結(jié)腸癌SW480細胞LIMK1和磷酸化LIMK1蛋白表達的影響。劃痕實驗和侵襲實驗檢測LIMK1 RNA沉默與DADS對SW480細胞遷移與侵襲的影響。結(jié)果RT-PCR與Western blot顯示,LIMK1-miR/SW480細胞LIMK1mNRA與蛋白表達明顯下調(diào),表明成功構(gòu)建穩(wěn)定沉默LIMK1基因的SW480細胞株。
免疫組化和Western blot顯示,45 mg.L-1DADS處理和沉默LIMK1組較未轉(zhuǎn)染組與空載體組SW480細胞LIMK1蛋白和磷酸化LIMK1明顯下調(diào)(P<0.05)。劃痕實驗和侵襲實驗發(fā)現(xiàn),沉默LIMK1或DADS處理SW480細胞的遷移與侵襲能力較未轉(zhuǎn)染組與空載體組明顯抑制(P<0.05)。而DADS處理沉默組抑制SW480細胞遷移和侵襲能力更為明顯(P<0.05)。結(jié)論沉默LIMK1基因可抑制SW480細胞遷移與侵襲,增強DADS抑制SW480細胞遷移與侵襲作用。
參考文獻
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