背景[1-3]
HBS緩沖液即Hepes緩沖的鹽溶液，是一種在生物學和細胞培養(yǎng)實驗中常用的緩沖液。其主要成分和特點如下：
HBS緩沖液成分：
Hepes：作為緩沖劑，維持溶液的pH值。
NaCl：提供滲透壓平衡，模擬細胞外環(huán)境。
通常還含有：氯化鉀（KCl）、葡萄糖、磷酸鹽等無機鹽和營養(yǎng)物質(zhì)。
pH值：HBS緩沖液的pH值通常在7.2到7.4之間，接近人體血液的pH值，適合細胞生長。
HBS緩沖液用途：
用于細胞培養(yǎng)，提供適宜的離子強度和pH環(huán)境。
在實驗中作為細胞、組織或生物大分子的稀釋液或洗滌液。
用于蛋白質(zhì)或核酸的實驗操作，如電泳、透析等。
儲存條件：HBS緩沖液通常在室溫下儲存，但某些配方可能需要冷藏保存。
HBS緩沖液
HBS緩沖液的使用步驟可能會根據(jù)具體的實驗目的和實驗室的標準操作流程有所不同，但以下是一個通用的使用步驟指南：
準備材料：
HBS緩沖液（已配制好或需自行配制）。
無菌容器或培養(yǎng)皿。
無菌吸管或移液器。
無菌濾器（如果需要過濾）。
pH計（如果需要調(diào)整pH）。
1.檢查緩沖液：
確認緩沖液的pH值和離子強度是否符合實驗要求。
檢查緩沖液是否過期或被污染。
2.準備無菌HBS緩沖液：
如果緩沖液是預先配制好的，直接使用無菌操作技術取出所需量。
如果需要自行配制，按照配方稱量所需的鹽類和Hepes，溶解在適量的去離子水中，然后使用pH計調(diào)整至所需pH值。
使用無菌濾器過濾緩沖液，以確保無菌。
3.溫育緩沖液（如果需要）：
將HBS緩沖液在37°C水浴中預熱，以模擬體內(nèi)溫度環(huán)境。
4.使用緩沖液：
使用無菌吸管或移液器將HBS緩沖液轉(zhuǎn)移到無菌容器或培養(yǎng)皿中。
如果用于細胞洗滌，輕輕將緩沖液加入細胞層，然后小心吸出，重復幾次以清洗細胞。
5.如果用于細胞培養(yǎng)，將細胞懸液與HBS緩沖液混合，然后接種到培養(yǎng)容器中。
6.儲存剩余緩沖液：
將未使用的無菌HBS緩沖液儲存在無菌容器中，在適當?shù)臈l件下（室溫或冷藏）保存。
應用[4][5]
HBS緩沖液可以用于重金屬鉛人工抗原的制備與純化及抗體免疫檢測體系的建立
重金屬鉛是具有持續(xù)毒性的有害物質(zhì),在自然環(huán)境中很難通過生物、化學方式降解轉(zhuǎn)化為無毒物質(zhì)；通過飲食進入人體后,則會在人體內(nèi)富集引起中毒,因此各國均對重金屬鉛在環(huán)境與食品中的殘留量有明確的、嚴格的限制。ELISA檢測方法相對原子吸收法、電感偶聯(lián)等傳統(tǒng)重金屬鉛檢測方法,具有經(jīng)濟、快速、便捷等優(yōu)勢,高特異性重金屬鉛人工抗原和抗體的研制是建立重金屬鉛酶聯(lián)免疫快速檢測的關鍵。
研究通過對制備的重金屬鉛人工抗原的純化,提高人工抗原免疫效果,免疫Balb/c小鼠,制備抗鉛單克隆抗體。重金屬鉛免疫檢測方法的建立將重金屬鉛免疫檢測方法的實驗條件進行優(yōu)化,為建立高效、準確的重金屬鉛抗體ELISA檢測方法打下基礎。本實驗在原有ELISA檢測方法的基礎上對實驗中使用的緩沖液類別、溶液pH值、檢測用包被抗原的包被時間及溫度等條件參數(shù)進行優(yōu)化,最終結果表明,實驗用緩沖液選用HBS緩沖液,并將pH值調(diào)整至7.4效果最好；包被抗原的包被時間在環(huán)境溫度37℃時為1小時,當環(huán)境溫度為4℃時包被時間為12小時為宜。
抗重金屬鉛單克隆抗體的制備與鑒定本實驗選用5-8周齡的Balb/c雌性小鼠進行動物免疫實驗。將(1)中制備的重金屬鉛人工抗原（含HBS緩沖液）用皮下多點注射的方式免疫小鼠,第四次免疫后,得到效價在1：102400至1：204800之間的小鼠血清,通過計算,不同種類包被抗原OD值的差異率達到131%,證明小鼠已對抗原產(chǎn)生特異性免疫應答,并產(chǎn)生抗體。取陽性小鼠脾細胞與飼養(yǎng)的骨髓瘤細胞融合,細胞融合率達85.91%,單克隆數(shù)目比例為41.1%,繼續(xù)亞克隆五次之后,得到兩株敏感性、特異性都比較理想的細胞株15E8和20C11,再采用體內(nèi)誘生的方法獲得腹水型單抗。
參考文獻
[1]Preparation of monoclonal antibodies against a derivative of semicarbazide as a metabolic target of nitrofurazone[J].Aizhong Gao;;Qiaolin Chen;;Yu Cheng;;Jing Lei;;Lingwen Zeng.Analytica Chimica Acta,2007(1)
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[3]Dialysis-based bioreactor systems for the production of monoclonal antibodies—alternatives to ascites production in mice[J].Matthew P.Bruce;;Victoria Boyd;;Christine Duch;;John R.White.Journal of Immunological Methods,2002(1)
[4]Lead analysis by anti-chelate fluorescence polarization immunoassay.[J].Johnson David K;;Combs Sherry M;;Parsen John D;;Jolley Michael E.Environmental science&technology,2002
[5]陳臣.重金屬鉛人工抗原的制備與純化及抗體免疫檢測體系的建立[D].南昌大學,2012.