背景^[1-3]

UACC-812(人乳腺導(dǎo)管瘤細(xì)胞）是一種人乳腺導(dǎo)管瘤細(xì)胞系，通常用于生物醫(yī)學(xué)研究，特別是乳腺癌的發(fā)病機(jī)制、藥物篩選和治療方法研究等領(lǐng)域。這種細(xì)胞系來源于一位乳腺癌患者的腫瘤樣本，并在實(shí)驗(yàn)室中經(jīng)過連續(xù)傳代培養(yǎng)得到。

UACC-812(人乳腺導(dǎo)管瘤細(xì)胞）具有貼壁生長的特性，形態(tài)上通常呈現(xiàn)為上皮樣細(xì)胞。在細(xì)胞培養(yǎng)中，需要使用含有適當(dāng)比例的胎牛血清（FBS）和抗生素的培養(yǎng)基來維持其生長。細(xì)胞傳代時，通常使用胰蛋白酶或胰酶-EDTA溶液進(jìn)行消化，并按照適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行傳代。

除了常規(guī)的細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)外，UACC-812(人乳腺導(dǎo)管瘤細(xì)胞）還可以用于基因表達(dá)分析、信號通路研究、藥物敏感性測試等。這些研究有助于科學(xué)家們更深入地了解乳腺癌的發(fā)病機(jī)制，發(fā)現(xiàn)新的治療靶點(diǎn)，以及評估不同治療策略對乳腺癌細(xì)胞的療效。

需要注意的是，UACC-812(人乳腺導(dǎo)管瘤細(xì)胞）是一種腫瘤細(xì)胞系，因此在實(shí)驗(yàn)過程中需要遵守相關(guān)的生物安全規(guī)定和操作規(guī)程。同時，對于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析和解讀，也需要結(jié)合具體的研究背景和目的進(jìn)行綜合考慮。

UACC-812(人乳腺導(dǎo)管瘤細(xì)胞）

UACC-812(人乳腺導(dǎo)管瘤細(xì)胞）培養(yǎng)操作

1)復(fù)蘇UACC-812(人乳腺導(dǎo)管瘤細(xì)胞）：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)UACC-812(人乳腺導(dǎo)管瘤細(xì)胞）傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3)UACC-812(人乳腺導(dǎo)管瘤細(xì)胞）凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應(yīng)用^[4-5]

UACC-812(人乳腺導(dǎo)管瘤細(xì)胞）可以用于MGBA表位長肽負(fù)載DC誘導(dǎo)特異性CTL對乳腺癌細(xì)胞的殺傷作用

研究預(yù)測與合成MGBA的表位長肽,體外驗(yàn)證其免疫活性,為肽疫苗的研究提供新的思路。研究方法:利用在線數(shù)據(jù)庫預(yù)測MGBA的HLA-A2表位,根據(jù)集中的表位設(shè)計(jì)MGBA來源的表位長肽,采用標(biāo)準(zhǔn)Fmoc固相合成法合成肽段。抽取HLA-A2+健康志愿者的外周血分離外周血單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)。采用粒-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)和白細(xì)胞介素4(IL-4)聯(lián)合刺激外周血單個核細(xì)胞,誘導(dǎo)產(chǎn)生DC。使用腫瘤壞死因子α(TNF-α)來促進(jìn)DC成熟。使用合成的表位長肽致敏DC(實(shí)驗(yàn)組,未致敏肽的DC作為對照組),誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性的CTL。

使用流式細(xì)胞術(shù)分析DC表面的分子標(biāo)志物(CD83、CD80、CD86、HLA-DR),酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)檢測IL-10、IL-12、IFN-γ的分泌水平,同時,應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分析DC-CTL、MGBA長肽DC-CTL分別對UACC-812(人乳腺導(dǎo)管瘤細(xì)胞）與MCF-7的殺傷效果。結(jié)果:通過生物信息學(xué)預(yù)測選取的MGBA表位長肽為P69-92,長肽負(fù)載組與對照組均誘導(dǎo)出形態(tài)典型、功能成熟的DC,與對照組相比,實(shí)驗(yàn)組DC分泌的IL-10和IL-12的水平分別為(161.90±17.90 vs 196.15±17.18;259.48±22.45vs 212.08±21.50),差異明顯(P<0.05),在UACC-812乳腺癌細(xì)胞的刺激下,肽段致敏組CTL分泌的IFN-γ為(636.64±61.09),明顯高于其他組(P<0.05)。Annexin V-FITC/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測發(fā)現(xiàn)MGBA P69-92 DC-CTL對UACC-812(人乳腺導(dǎo)管瘤細(xì)胞）(HLA-A2+,MGBA+)殺傷的最佳效靶比為20:1,與DC-CTL相比,MGBA P69-92DC-CTL對UACC-812(人乳腺導(dǎo)管瘤細(xì)胞）有明顯的殺傷活性(P<0.05),而DC-CTL與MGBA P69-92DC-CTL對MCF-7(HLA-A2+,MGBA-)細(xì)胞沒有顯著的殺傷性,兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

結(jié)論:MGBA表位長肽P69-92致敏DC后可被其有效攝取及提呈,且誘導(dǎo)產(chǎn)生的表位特異性CTL對HLA-A2及MGBA雙陽性的UACC-812(人乳腺導(dǎo)管瘤細(xì)胞）有特異性的殺傷作用,分泌高水平的IFN-γ;對MGBA陰性的UACC-812(人乳腺導(dǎo)管瘤細(xì)胞）沒有殺傷作用。在此研究的基礎(chǔ)上,可以進(jìn)一步通過小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其免疫活性,這一研究結(jié)果為免疫疫苗的設(shè)計(jì)奠定了基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

[1]HBV-Derived Synthetic Long Peptide Can Boost CD4+and CD8+T-Cell Responses in Chronic HBV Patients Ex Vivo.[J].Dou Yingying;;van Montfoort Nadine;;van den Bosch Aniek;;de Man Robert A;;Zom Gijs G;;Krebber Willem-Jan;;Melief Cornelis J M;;Buschow Sonja I;;Woltman Andrea M.The Journal of infectious diseases,2018

[2]A pilot study of the immunogenicity of a 9-peptide breast cancer vaccine plus poly-ICLC in early stage breast cancer.[J].Dillon Patrick M;;Petroni Gina R;;Smolkin Mark E;;Brenin David R;;Chianese-Bullock Kimberly A;;Smith Kelly T;;Olson Walter C;;Fanous Ibrahim S;;Nail Carmel J;;Brenin Christiana M;;Hall Emily H;;Slingluff Craig L.Journal for immunotherapy of cancer,2017

[3]Efficient Eradication of Established Tumors in Mice with Cationic Liposome-Based Synthetic Long-Peptide Vaccines[J].Eleni Maria Varypataki;;Naomi Benne;;Joke Bouwstra;;Wim Jiskoot;;Ferry Ossendorp.Cancer Immunology Research,2017(3)

[4]Clinical study of a survivin long peptide vaccine(SurVaxM)in patients with recurrent malignant glioma.[J].Fenstermaker Robert A;;Ciesielski Michael J;;Qiu Jingxin;;Yang Nuo;;Frank Cheryl L;;Lee Kelvin P;;Mechtler Laszlo R;;Belal Ahmed;;Ahluwalia Manmeet S;;Hutson Alan D.Cancer immunology,immunotherapy:CII,2016

[5]胡園園.MGBA表位長肽負(fù)載DC誘導(dǎo)特異性CTL對乳腺癌細(xì)胞的殺傷作用[D].中國醫(yī)科大學(xué),2019.