CY5-NHS酯，英文名為Sulfo-Cyanine5 NHS ester，它是一種用于標(biāo)記肽，蛋白質(zhì)，寡核苷酸的氨基基團(tuán)的花菁染料，具有較好的水溶性并且可溶于二甲基亞砜等強(qiáng)極性有機(jī)溶劑。CY5-NHS酯常被應(yīng)用于生物分子標(biāo)記，熒光成像及其他熒光生物分析，在生物化學(xué)基礎(chǔ)研究中應(yīng)用較多。

圖1 CY5-NHS酯的化學(xué)結(jié)構(gòu)式

基本介紹

CY5-NHS酯是一種蛋白標(biāo)記熒光磺化染料，它的激發(fā)波長為646 nm，發(fā)射波長為664 nm，這一特性使其在紅光區(qū)域有較好的熒光表現(xiàn)，有利于在生物樣品中減少背景干擾?；ㄝ既玖嫌袃煞N，一種是磺化染料，一種是非磺化染料?；腔幕ㄝ既玖鲜撬苄缘?，它們在水性環(huán)境中不需要使用有機(jī)助溶劑即可進(jìn)行標(biāo)記。非磺化的花菁染料需要借助有機(jī)溶劑（比如DMSO）才能在水性環(huán)境中溶解后進(jìn)行標(biāo)記。非磺化的花菁染料的熒光性質(zhì)對溶劑和周圍環(huán)境的依賴性很小。

標(biāo)記多肽

將1.0 mgCY5-NHS酯溶解于400 μL DMSO后,加入到盛有多肽(D-ser2)-leucine-enkephalin acetate ( 0.75 mg) 的400 μL DMSO溶液中。(染料CY5-NHS酯和多肽投料比是 1:1)。然后往上述混合液中加入15 μL三乙胺，常溫避光攪拌反應(yīng)混合物過夜。反應(yīng)結(jié)束后用HPLC 純化蛋白，使用蛋白C18柱子(25 cm×10 mm)，每次上樣注入2×400 μL，30分鐘梯度洗脫。洗脫方法為：從0.1% 三氟乙酸水溶液到MeCN∶H2O(0.1% TFA)=70∶30，流速4mL /min。(對不同的蛋白選擇不同的合適HPLC梯度流動相)收集適當(dāng)?shù)纳珟Х?，?biāo)記多肽的保留時(shí)間比未標(biāo)記的多肽長。產(chǎn)品冷凍干燥成粉末或在水溶液中，-20℃避光儲存;必要時(shí)可用質(zhì)譜表征。[1]

穩(wěn)定性

CY5-NHS酯對強(qiáng)光照射和熱源較為敏感，因此在使用過程中需要避免過度的光照和高溫。通常建議將其進(jìn)行密封保存并置于較低的溫度環(huán)境（-20度冰箱中）以確保其穩(wěn)定性和長期保存的可行性。

參考文獻(xiàn)

[1] Di Shen, Haojie Yu, et al, ACS Applied Materials & Interfaces 2023 15 (26), 31330-31343.