背景技術(shù)

煙堿俗稱尼古丁，是一種存在于茄科植物(茄屬)中的生物堿，也是煙草的重要成分，占煙草中總生物堿的98%。煙堿是煙草的主要活性成分，也是導(dǎo)致吸煙成癮或產(chǎn)生依賴性的主要因素。進(jìn)入人體內(nèi)的尼古丁約80%在肝臟中的細(xì)胞色素酶P4502A6的作用下代謝為可替寧。可替寧隨血液進(jìn)入到人體各個部位，在血液、尿液、唾液等體液和肝臟及腦等器官中均發(fā)現(xiàn)可替寧的分布?？商鎸幵隗w內(nèi)的半減期為18~22h，且由于尼古丁是可替寧的唯一來源，因此是目前公認(rèn)的評價卷煙煙氣暴露的特異性生物標(biāo)志物。

由于尿液具有非創(chuàng)傷性、來源廣等特點，被廣泛的用來評價卷煙煙氣暴露情況。分析尿液中可替寧的方法主要有：酶聯(lián)免疫法、毛細(xì)管電泳化學(xué)發(fā)光法、氣相色譜-質(zhì)譜法、液相色譜法和液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)。LC-MS/MS比傳統(tǒng)的分析方法靈敏度更高，選擇性更強，但往往需要繁瑣的液液萃取或者固相萃取來凈化尿液樣本。Fan等建立了一個直接稀釋過濾進(jìn)樣分析尿液中可替寧的LC-MS/MS方法，此方法簡化了前處理過程，選取了一根常規(guī)的液相色譜柱(柱徑:4.6mm,粒徑:5μm)，但其分離的效果不如小粒徑、窄內(nèi)徑的質(zhì)譜色譜柱；且過大的流速(1mL/min)會增加有機溶劑和霧化氣體的損耗。本文將介紹一種簡單、快速、選擇性好的測定尿液中的可替寧的LC-MS/MS方法，用于中國烤煙型卷煙吸食人群尿液中可替寧的測定。

檢測方法

1、樣品處理

尿液樣品于室溫下解凍，混合均勻后，取100μL的尿液，加入20μL的氘代內(nèi)標(biāo)(可替寧-d₃)，加入880μL純水，以10000r/min離心10min。離心的上清液過0.22μm聚醚砜水相濾膜，取5μL濾液引入LC-MS/MS分離分析。

2、試驗條件

2.1、色譜條件：Agilent Zorbax Eclipse XDB-Cs色譜柱(150mmx2.1mm,3.5μm);流動相A：0.1%甲酸水溶液；流動相B：0.1%乙酸甲醇溶液；柱溫40℃；進(jìn)樣量5μL。梯度洗脫條件：0~2min,30%B；2~5min,90%B；5~7min,30%B；7~8min,30%B；流速為200μL/min時洗脫尿液樣品，分析時間為8min。

2.2、質(zhì)譜條件：電噴霧離子源，多反應(yīng)監(jiān)測正離子掃描方式；電噴霧電壓：5000V；霧化氣壓力：348kPa；氣簾氣壓力：209kPa；輔助加熱氣壓力：348kPa；溫度：500℃；碰撞電壓：10eV；去簇電壓：58V；駐留時間：100ms。

參考文獻(xiàn)

[1]劉彤,侯宏衛(wèi),張小濤,等. 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定尿液中的可替寧[J]. 質(zhì)譜學(xué)報,2012,33(4):252-256.