背景[1-3]
SK-MEL-28人惡性黑色素瘤貼壁細(xì)胞系是一種人惡性黑色素瘤貼壁細(xì)胞系，由美國(guó)國(guó)立癌癥研究所（National Cancer Institute）建立。該細(xì)胞系是通過手術(shù)切除的黑色素瘤組織進(jìn)行傳代培養(yǎng)而建立的，因此具有貼壁生長(zhǎng)的特性。
SK-MEL-28人惡性黑色素瘤貼壁細(xì)胞系被廣泛應(yīng)用于黑色素瘤研究，包括黑色素瘤的發(fā)生、發(fā)展、治療和藥物篩選等方面的研究。該細(xì)胞系具有較高的異質(zhì)性，可以作為黑色素瘤研究的模型之一。
SK-MEL-28人惡性黑色素瘤貼壁細(xì)胞系
SK-MEL-28人惡性黑色素瘤貼壁細(xì)胞系細(xì)胞培養(yǎng)操作
1)復(fù)蘇SK-MEL-28人惡性黑色素瘤貼壁細(xì)胞系細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)SK-MEL-28人惡性黑色素瘤貼壁細(xì)胞系細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3)SK-MEL-28人惡性黑色素瘤貼壁細(xì)胞系細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
應(yīng)用[4-5]
SK-MEL-28人惡性黑色素瘤貼壁細(xì)胞系可以用于敲低潛在轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β結(jié)合蛋白2(LTBP2)抑制SK-MEL-28惡性黑素瘤細(xì)胞的侵襲和遷移
檢測(cè)潛在轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β結(jié)合蛋白2(LTBP2)在惡性黑素瘤組織及細(xì)胞中的表達(dá),及其對(duì)惡性黑素瘤細(xì)胞侵襲和遷移的影響。
方法：采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)95例惡性黑素瘤組織LTBP2的表達(dá),并采用Spearman秩相關(guān)法分析LTBP2陽(yáng)性率與黑素瘤臨床病理指標(biāo)的關(guān)系。采用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)惡性黑素瘤組織和SK-MEL-28人惡性黑色素瘤貼壁細(xì)胞系LTBP2的mRNA水平,Western blot法檢測(cè)SK-MEL-28黑素瘤細(xì)胞LTBP2的蛋白水平。利用小干擾RNA技術(shù)沉默SK-MEL-28人惡性黑色素瘤貼壁細(xì)胞系細(xì)胞中LTBP2的表達(dá),TranswellTM實(shí)驗(yàn)檢測(cè)敲低LTBP2后對(duì)SK-MEL-28人惡性黑色素瘤貼壁細(xì)胞系細(xì)胞侵襲能力的影響,細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)對(duì)細(xì)胞遷移的影響。結(jié)果惡性黑素瘤組織中LTBP2陽(yáng)性率顯著高于皮膚良性痣組織,LTBP2陽(yáng)性率與惡性黑素瘤患者TNM分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移正相關(guān)。LTBP2在SK-MEL-28人惡性黑色素瘤貼壁細(xì)胞系細(xì)胞中的表達(dá)高于正常黑素HEMa-LP細(xì)胞。敲低SK-MEL-28人惡性黑色素瘤貼壁細(xì)胞系細(xì)胞LTBP2的水平后,SK-MEL-28人惡性黑色素瘤貼壁細(xì)胞系細(xì)胞侵襲和遷移能力降低。
結(jié)論：LTBP2在皮膚惡性黑素瘤組織和細(xì)胞高表達(dá),敲低SK-MEL-28人惡性黑色素瘤貼壁細(xì)胞系細(xì)胞LTBP2的水平后,抑制SK-MEL-28人惡性黑色素瘤貼壁細(xì)胞系細(xì)胞的侵襲及遷移。
參考文獻(xiàn)
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