背景^[1-3]

大鼠載脂蛋白C3(APO-C3)ELISA試劑盒是采用雙抗體一步夾心法檢測樣品中人載脂蛋白C3(APO C3)的水平。

實(shí)驗(yàn)原理：往預(yù)先包被人載脂蛋白C3(Apo-C3)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人載脂蛋白C3(Apo-C3)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度。

大鼠載脂蛋白C3(APO-C3)ELISA試劑盒

操作步驟：

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

應(yīng)用^[4][5]

用于刺絡(luò)瀉血對(duì)高脂血癥模型大鼠ApoC3及LPL的影響研究

采用高脂飼料投喂法建立高脂血癥大鼠模型,從載脂蛋白C3及脂蛋白脂肪酶兩個(gè)方面,對(duì)刺絡(luò)瀉血千預(yù)高脂血癥大鼠的降脂效果進(jìn)行評(píng)估,并對(duì)其干預(yù)高脂血癥的作用機(jī)制進(jìn)行探討。

方法1.實(shí)驗(yàn)分組:將32只雄性SD大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、刺絡(luò)瀉血組、陽性藥物組4組。各組大鼠均在實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。

2. 造模方法:在本研究中,采用國內(nèi)普遍使用的高脂飼料投喂法造模。具體方法:將雄性SD大鼠以高脂詞料喂養(yǎng)造模,高脂飼料的配方為:82.89%基礎(chǔ)飼料、1%膽固醇、10%豬油、0.2%丙基硫氧嘧啶,5%蛋黃粉和1%%膽酸鈉,造模持續(xù)28天。

3. 干預(yù)方法:（1）空白對(duì)照組:常規(guī)飼養(yǎng)8周,不做任何處理,從第5周開始,去離子水灌胃,僅抓取、按壓,每周2次;（2）模型對(duì)照組:高脂詞料喂養(yǎng)8周,從第5周開始,去離子水灌胃,僅抓取、按壓,每周2次;（3）刺絡(luò)瀉血組:高脂詞料喂養(yǎng)8周,從第5周開始,去離子水灌胃,豐隆,足三里刺絡(luò)瀉血,出血量為0.3ml-0.5ml（換算公式為出血量=體質(zhì)量*7.4%*2%）,每周2次;（4）陽性藥物組:高脂飼料喂養(yǎng)8周,從第5周后開始,按照1.8mg/（kg*d）立普妥灌胃,每周2次。

4. 指標(biāo)檢測及方法:采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測各組大鼠血清中血脂四項(xiàng)、ApoC3的含量及LPL的活性。

結(jié)果1.各組大鼠血脂四項(xiàng)的變化實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,與正常對(duì)照組相比,模型對(duì)照組TC、LDL含量均顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;與模型組相比,刺絡(luò)瀉血組與陽性藥物組TC、LDL含量顯著降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;刺絡(luò)瀉血組與陽性藥物組比較,血脂四項(xiàng)含量無顯著差異（P>0.05）。

2. 各組大鼠ApoC3的含量及LPL的活性變化（1）ApoC3的含量變化:與正常對(duì)照組相比,模型對(duì)照組ApoC3含量顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;與模型組相比,刺絡(luò)瀉血組與陽性藥物組ApoC3含量顯著降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;刺絡(luò)瀉血組與陽性藥物組比較,ApoC3含量無顯著差異（P>0.05）。（2）LPL活性的變化:與正常對(duì)照組相比,模型對(duì)照組LPL活性無顯著差異（P>0.05）;與模型組相比,刺絡(luò)瀉血組與陽性藥物組LPL活性物顯著差異（P>0.05）;刺絡(luò)瀉血組與陽性藥物組比較,LPL活性無顯著差異（P>0.05）;各組間均無顯著差異。

結(jié)論1、大鼠“豐隆穴”、“足三里穴”刺絡(luò)瀉血,能夠有效降低血清中TC、TG、LDL-C含量,升高HDL-C含量,穩(wěn)定血脂水平。

2、大鼠“豐隆穴”、“足三里穴”刺絡(luò)瀉血,能降低血清ApoC3的含量、不影響LPL的活性。

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