背景及概述[1]
杠柳甙元即杠柳苷元，杠柳苷元有強(qiáng)心和抗腫瘤等藥理作用。據(jù)中華醫(yī)學(xué)雜志[J].1956，7：651李章文等《杠柳皮(北五加皮)的強(qiáng)心作用》一文報(bào)道，杠柳苷元也有強(qiáng)心作用，而且起效迅速，蓄積性小。據(jù)中草藥[J].2006，37(4)：519陳書紅等《香加皮的抗腫瘤活性成分研究(I)》一文中報(bào)道：杠柳苷元對(duì)MCF-7腫瘤細(xì)胞增殖有很強(qiáng)的抑制作用。、
杠柳苷元為強(qiáng)心苷元，不僅具有強(qiáng)心作用，還具有抗炎、抗腫瘤等藥理作用。顧為等發(fā)表的“杠柳苷元對(duì)肥大細(xì)胞脫顆粒及釋放組胺影響的研究”和韓宇博等發(fā)表的“杠柳苷元的抗腫瘤作用研究”都對(duì)杠柳苷元做了實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。
杠柳苷元在中藥香加皮中含量較低，制備難度較大，多是以杠柳毒苷為原料水解得來。
制備[1-2]
報(bào)道一、
杠柳甙元的制備方法，其工藝步驟為：
(1)取香加皮提取物100克，用pH為3的鹽酸水溶液與等體積的氯仿混合溶液進(jìn)行酸水解，時(shí)間為1小時(shí)，溫度為80℃。
(2)水解完畢分出氯仿層，濃縮干燥得到中間體A。
(3)將中間體A進(jìn)行柱層析，柱填料為硅膠，采用梯度洗脫，洗脫劑為10∶0～10的乙酸乙酯—甲醇混合溶液；收集含有杠柳苷元的餾分，濃縮干燥后得到中間體B；
(4)將中間體B用乙醇進(jìn)行重結(jié)晶，得到杠柳甙元結(jié)晶1.7克，收率為1.7％。
報(bào)道二、
香加皮藥材粉碎，取1000g，加入8L90%甲醇溶液超聲提取60min，濾過液體再加3L90%甲醇超聲提取30min，合并提取液回收甲醇，加500ml蒸餾水共沸1小時(shí)，加適量硅藻土趁熱離心，收集離心液，檸檬酸調(diào)節(jié)pH4.5，加熱至50℃，加入1g蝸牛酶保溫酶解32小時(shí)，酶解液減壓濃縮，離心得粗品12g。取氯仿、甲醇、水按4：3：3比例混合，取上相注入色譜柱作固定相，開啟高速逆流色譜儀，調(diào)整轉(zhuǎn)速800r/min，注入流動(dòng)相，平衡后，調(diào)整流速2ml/min，氯仿溶解粗品，進(jìn)樣，通過檢測(cè)儀定時(shí)收集流分，流分回收試劑干燥，連續(xù)制備，得杠柳甙元6.2g，含量96.6%。
抗癌機(jī)制[3-4]
李世堅(jiān)等人分析了中藥香加皮杠柳甙元誘導(dǎo)人鼻咽癌CNE2細(xì)胞凋亡及其作用機(jī)制。方法應(yīng)用CellTiterGlo發(fā)光法檢測(cè)杠柳甙元對(duì)鼻咽癌CNE2細(xì)胞增殖的影響,并計(jì)算其半數(shù)抑制濃度（IC50）;采用熒光定量PCR檢測(cè)經(jīng)杠柳甙元處理后細(xì)胞凋亡相關(guān)基因mRNA表達(dá)的改變;采用Western blot法檢測(cè)相應(yīng)蛋白酶活性變化。結(jié)果 （1）在一定濃度范圍內(nèi),隨杠柳甙元濃度升高,對(duì)CNE2細(xì)胞增殖的抑制作用增加;杠柳苷元作用于CNE2細(xì)胞在48 h的IC50為1.712μmol/L。（2）杠柳苷元濃度為1μmol/L的caspase-3 mRNA表達(dá)量少量上升作用不明顯、2μmol/L的caspase-3 mRNA表達(dá)量上升,有一定的作用（P<0.05）。而濃度為4μmol/L的caspase-3 mRNA表達(dá)量顯著上調(diào),差異顯著（P<0.01）。與對(duì)照組相比,不同濃度下杠柳甙元的EGFR mRNA的表達(dá)量影響結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（3）杠柳甙元處理CNE2細(xì)胞48 h后, 杠柳甙元組的caspase-3蛋白酶的表達(dá)水平較對(duì)照組顯著上調(diào)（P<0.01）;EGFR蛋白酶表達(dá)量與對(duì)照組相比差異不大（P> 0.05）。結(jié)論杠柳甙元可明顯抑制鼻咽癌細(xì)胞的增殖,其機(jī)制可能為通過上調(diào)凋亡基因caspase-3及其蛋白酶的表達(dá)而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡
韓宇博等人研究了中藥香加皮提取單體化合物杠柳甙元對(duì)體外培養(yǎng)S180、SGC-7901、A549、LOVO、MCF-7、Hep G2腫瘤細(xì)胞株的毒性作用,探討杠柳甙元對(duì)荷瘤模型小鼠的抗腫瘤作用。方法四氮唑鹽（MTT）法測(cè)定杠柳甙元對(duì)體外培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞的毒性作用,移植性荷瘤動(dòng)物模型評(píng)價(jià)杠柳甙元對(duì)整體動(dòng)物的抗腫瘤作用。結(jié)果杠柳甙元對(duì)體外培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞的毒性作用顯著,對(duì)常見腫瘤細(xì)胞株的個(gè)數(shù)抑制濃度介于（0.461.50）μg/mL;荷瘤模型動(dòng)物給予杠柳苷元10.0 mg/kg劑量時(shí),S180實(shí)體瘤抑瘤率達(dá)到51.0%±17.0%,使荷腹水瘤小鼠存活時(shí)間延長94.2±13.1%,與臨床常用抗腫瘤藥物FU相當(dāng)（P>0.05）;抗腫瘤作用有明顯的劑量依賴關(guān)系;部分受試動(dòng)物給藥后出現(xiàn)食欲減退、脫毛、抗拒等不良反應(yīng),未見死亡。結(jié)論杠柳甙元有顯著的抗腫瘤作用,同時(shí)也有一定的不良反應(yīng),其潛在開發(fā)價(jià)值有待進(jìn)一步研究評(píng)價(jià)。
參考文獻(xiàn)
[1][中國發(fā)明]CN200610013621.9一種杠柳苷元的制備方法
[2][中國發(fā)明]CN201110210631.2一種酶法水解制備杠柳苷元的方法
[3]李世堅(jiān),焦愛軍.杠柳苷元誘導(dǎo)鼻咽癌細(xì)胞凋亡及其作用機(jī)制的研究[J].臨床合理用藥雜志,2021,14(17):30-32+35.DOI:10.15887/j.cnki.13-1389/r.2021.17.011.
[4]韓宇博,趙愛國.杠柳苷元的抗腫瘤作用研究[J].中國小兒血液與腫瘤雜志,2008(01):1-5.