背景^[1-3]

鼠抗組蛋白3(賴氨酸79位二甲基化)單克隆抗體是一類可以特異性結(jié)合鼠抗組蛋白3(賴氨酸79位二甲基化)的單一抗體，主要用于體外特異性檢測組蛋白3(賴氨酸79位二甲基化)的免疫學(xué)實驗。

組蛋白（histone）是真核生物體細(xì)胞染色質(zhì)與原核細(xì)胞中的堿性蛋白質(zhì)，和DNA共同組成核小體結(jié)構(gòu)。它們是染色質(zhì)的主要蛋白質(zhì)組分，作為DNA纏繞的線軸，并在基因調(diào)控中發(fā)揮作用，但是原核細(xì)胞組蛋白對基因調(diào)控的作用非常微弱。沒有組蛋白，染色體中未纏繞的DNA將非常長（人類DNA中的長寬比超過1000萬比1）。例如，每個人類二倍體細(xì)胞（含有23對染色體）具有約1.8米長的DNA，但是在組織蛋白上纏繞它具有約90微米（0.09毫米）的染色質(zhì)，當(dāng)在有絲分裂期間復(fù)制和濃縮時，其導(dǎo)致約120微米的染色體。

鼠抗組蛋白3(賴氨酸79位二甲基化)單克隆抗體免疫組化

組蛋白含有H1，H2A，H2B，H3，H4等5種成分。除H1外，其他4種組蛋白均分別以二聚體(共八聚體）相結(jié)合，形成核小體核心。DNA便纏繞在核小體的核心上。而H1則與核小體間的DNA結(jié)合。因此，一般認(rèn)為組蛋白作為結(jié)構(gòu)支持體的作用比其基因調(diào)節(jié)作用更為重要。鳥類、兩棲類等含有細(xì)胞核的紅細(xì)胞中，含有一種叫H5的特殊組蛋白。此外，在停止增殖的細(xì)胞中，還含有一種叫H1°的組蛋白，H1°的結(jié)構(gòu)與H5相類似。組蛋白可受到甲基化、乙?；?、磷酸化、聚ADP核糖?；?，以及與泛醌(ubiquinone）相結(jié)合等幾種類型的修飾。組蛋白的修飾與染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的變化及基因活性控制的相關(guān)性等。

應(yīng)用^[4][5]

用于組蛋白去乙酰化酶抑制劑聯(lián)合唑來膦酸對多發(fā)性骨髓瘤荷瘤小鼠抗腫瘤作用及機制的研究

探討了組蛋白去乙?；敢种苿┡c唑來膦酸以不同方式聯(lián)合應(yīng)用對多發(fā)性骨髓瘤荷瘤鼠的作用，并通過細(xì)胞凋亡檢測及血清β2微球蛋白（β2-MG）水平的定量以評價對多發(fā)性骨髓瘤的療效，以期為臨床治療提供更多的手段及方法。

方法：1細(xì)胞培養(yǎng)和傳代人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株KM3細(xì)胞，用含10%滅活胎牛血清，100U/ml青霉素，100μg/ml鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)液，置于37℃，50mL/L CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。2～3d傳代1次，實驗采用對數(shù)生長期細(xì)胞，臺盼藍(lán)染色拒染率95%以上。

2建立KM3荷瘤裸鼠模型將處于對數(shù)生長期的KM3細(xì)胞用無血清的RPMI1640培養(yǎng)基洗滌2次后，重懸于1:1混勻無血清的RPMI1640培養(yǎng)基中，調(diào)整細(xì)胞密度為1×108/ml，每只裸鼠右前肢外側(cè)皮下接種0.2ml（細(xì)胞數(shù)2×107/只），共接種26只。

3觀察裸鼠成瘤率各組裸鼠以接種瘤細(xì)胞后15天為限，裸鼠右前肢外側(cè)可見可測量腫塊為標(biāo)準(zhǔn)，成瘤率=成瘤只數(shù)/總只數(shù)×100％。

4實驗動物分組成瘤裸鼠16只，隨機分為4組（每組4只）：a.空白組；b.唑來膦酸組；c.LBH-589組；d.唑來膦酸與LBH-589聯(lián)合用藥組。各組以接種瘤細(xì)胞后第16天開始，a組不予用藥，b組及c組每只裸鼠分別皮下注射濃度為0.1μmol/L的唑來膦酸及濃度為5nmol/L的LBH-589各0.2ml，d組每只裸鼠先后皮下注射濃度為0.1μmol/L的唑來膦酸及濃度為5nmol/L的LBH-589各0.2ml；每隔2d注射一次，共注射5次（上述各組劑量參照我科前期體外實驗確定）。

5抗腫瘤效果觀察5.1觀察荷瘤小鼠的一般情況及腫瘤的形態(tài)、體積變化：5.1.1觀察荷瘤小鼠的一般情況：包括精神狀況、皮膚光澤、活動度、飲食、飲水情況及體重變化。5.1.2藥物5次注射完畢4周后斷頸處死荷瘤小鼠，剝離腫塊，測量腫塊的長徑及短徑，并根據(jù)公式計算腫瘤體積和腫瘤生長抑制率（IR）：V=（長徑×短徑2）/2；IR=（V0-Vn）/V0×l00％（V0代表空白組的腫瘤體積，Vn為治療組的腫瘤體積）；各組裸鼠腫瘤體積均取其平均值。

5.2細(xì)胞凋亡檢測將剝離的實體瘤組織解聚、分散，制備成組織勻漿，用流式細(xì)胞儀檢測唑來膦酸單藥組、LBH-589單藥組及兩藥聯(lián)合用藥組的KM3細(xì)胞凋亡率。5.3應(yīng)用放射免疫法（RIA）測定β2-MG水平。

結(jié)果：1人KM3細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤的成瘤：接種后4天于接種處，即右前肢外側(cè)可見微小突起，約7-9天后可見注射部位出現(xiàn)可測量腫塊，隨時間推移腫物不斷增大，接種成瘤率65.38％（17/26）。成瘤15天后移植瘤短徑基本都在5mm以上，取其中腫物形態(tài)、大小相近的16只裸鼠用于實驗分組。

2實驗動物的一般狀況：a組裸鼠在實驗后期日漸衰竭，精神萎靡，皮膚暗淡，飲食及飲水量較前明顯減少，體重明顯減輕。b組與c組裸鼠精神尚可，活動度略差，飲食、飲水量輕度減少。d組裸鼠精神狀況、活動度、皮膚、飲食飲水量及體重均未見明顯異常變化。

3各實驗組荷瘤小鼠的腫瘤形態(tài)及體積變化：a組隨時間延長，腫瘤體積明顯逐漸增大。b組及c組腫瘤體積稍有增大。d組隨時間延長腫瘤體積未見明顯增大，甚至稍有縮小。

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