背景及概述

PROTEIN G AGAROSE又叫protein G瓊脂糖。蛋白G是從G類鏈球菌（Streptococci）中分離出來(lái)的胞壁蛋白，分子量25kDa。蛋白G可用于純化不能與Protein A很好結(jié)合的哺乳動(dòng)物單抗和多抗IgG。相對(duì)于蛋白A，蛋白G對(duì)于大多數(shù)哺乳動(dòng)物的IgG有著更高的親和力，尤其是對(duì)于IgG的亞基，如人 IgG3，小鼠IgG1和鼠 IgG2a。與蛋白A不同，蛋白G不與狗IgG結(jié)合、不結(jié)合人IgM，IgD，或IgA。此外，蛋白G還可以和某些抗體的Fab 和F (ab’)2 段結(jié)合。蛋白G 瓊脂糖將蛋白G作為親和配基被偶聯(lián)到瓊脂糖凝膠基質(zhì)上，可以廣泛、更強(qiáng)地結(jié)合更多類型的IgG, 多克隆IgG及人IgG，同時(shí)血清蛋白結(jié)合水平更低，純度更高，配基脫落也相對(duì)更低。

應(yīng)用 ^[1]

LRR受體激酶是一種表達(dá)在植物細(xì)胞膜表面的跨膜蛋白。LRR受體激酶作為重要的影響植物生長(zhǎng)發(fā)育的一類調(diào)控分子，廣泛作用于各類信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程。

在研究LRR受體激酶的過(guò)程中，其下游效應(yīng)因子的獲得，通常是在過(guò)表達(dá)靶基因的背景下將轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行突變。而抑制表型的突變體所含有的突變基因所對(duì)應(yīng)的蛋白便是受體激酶的下游靶標(biāo)。而另一種尋找LRR受體激酶下游直接效應(yīng)因子的方法便是酵母雙雜交，但較低的得率以及假陽(yáng)性也會(huì)使得該方法使用受限。另外，作為膜蛋白，LRR受體激酶通常很難純化。這也使得常規(guī)的生化策略很難找到其直接下游底物。CN201810528770.1提供一種LRR受體激酶的底物尋找方法，其包括：S1：將LRR受體激酶與ATP-γ-S進(jìn)行孵育，得到混合物；S2：將所述混合物與富含所述LRR受體激酶的組織的總蛋白進(jìn)行孵育，得到第二混合物；S3：將所述第二混合物與PNBM進(jìn)行孵育，得到第三混合物；

S4：去除所述第三混合物中的PNBM，得到第四混合物；S5：將所述第四混合物用預(yù)處理的protein G瓊脂糖進(jìn)行孵育，離心得到上清液；S6：將與protein G瓊脂糖偶聯(lián)的抗硫代磷酸酯的單克隆抗體與所述上清液進(jìn)行孵育，得到沉淀物；S7：對(duì)所述沉淀物進(jìn)行分析，確定所述LRR受體激酶的底物。

主要參考資料

[1] CN201810528770.1 LRR受體激酶的底物尋找方法