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酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂(YPD)對照培養(yǎng)基的應(yīng)用

2021/11/8 15:18:41

背景[1-3]

酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂(YPD)對照培養(yǎng)基為淡黃色均一粉末,加入水中混懸均勻,滅菌后為黃色半透明液體,用于測定酵母菌總數(shù)。

成分(g/L):蛋白胨10.0葡萄糖20.0酵母浸出粉5.0瓊脂14.0。

檢驗(yàn)原理:蛋白胨提供碳源和氮源;酵母浸出粉提供B族維生素能促進(jìn)生長;葡萄糖提供能源;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。

酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂(YPD)對照培養(yǎng)基

用法:稱取本品49.0g,加熱溶解于1000ml純化水中,121℃高壓滅菌15分鐘,備用。

對照品培養(yǎng)基系指按培養(yǎng)基處方特別制備、質(zhì)量優(yōu)良的培養(yǎng)基,用于培養(yǎng)基適用性檢查。常用于對照試驗(yàn)。

通常,一個對照實(shí)驗(yàn)分為實(shí)驗(yàn)組和對照組。實(shí)驗(yàn)組,是接受實(shí)驗(yàn)變量處理的對象組;對照組也稱控制組,對實(shí)驗(yàn)假設(shè)而言,是不接受實(shí)驗(yàn)變量處理的對象組,至于哪個作為實(shí)驗(yàn)組,哪個作為對照組,一般是隨機(jī)決定,這樣從理論上說,由于實(shí)驗(yàn)組與對照組無關(guān)變量影響是相等、平衡的,故實(shí)驗(yàn)組與對照組兩者之差異,則可認(rèn)定為是來自實(shí)驗(yàn)變量的效果,這樣實(shí)驗(yàn)結(jié)果是可信的。

應(yīng)用[4][5]

用于有機(jī)結(jié)合鐵鋅轉(zhuǎn)化菌種的篩選鑒定及其藥理活性研究

鐵和鋅都是人和動物生命活動中不可缺少的重要微量元素,與很多基礎(chǔ)性生理活動密切相關(guān)。缺鐵會引起人及動物缺鐵性貧血;缺鋅會影響身體和智力發(fā)育、免疫力低下及一些其他相關(guān)疾病。通過微生物轉(zhuǎn)化,尤其是利用釀酒酵母轉(zhuǎn)化可獲得結(jié)合態(tài)的有機(jī)鐵、有機(jī)鋅,并具有低毒和高吸收利用率的特性,但是利用酵母轉(zhuǎn)化,存在轉(zhuǎn)化效率低,且遺傳不穩(wěn)定等問題。

從自然環(huán)境中篩出選具有高富集鐵、鋅能力的菌株進(jìn)行研究。1、本實(shí)驗(yàn)采用含有高濃度鐵、鋅的培養(yǎng)基,通過逐步增加鐵、鋅濃度的方法,最終獲得了高富集鐵菌株BY-1109,其耐鐵量為10000mg/L,細(xì)胞鐵富集量達(dá)10.23mg/g干重,和高富集鋅菌株LZ-1108,其耐鋅量為8000mg/L,細(xì)胞鋅富集量達(dá)6.7mg/g干重。

2、實(shí)驗(yàn)對高富集鐵、高富集鋅菌株進(jìn)行了形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定,對其發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化。分子生物學(xué)鑒定表明,高富集鐵菌株與已發(fā)表膠紅酵母(Rhodotorula mucilaginosa)的18s rDNA序列具有99%的同源性,初步鑒定該菌為紅酵母(Rhodotorula),其形態(tài)學(xué)與該屬相符。該菌株發(fā)酵條件為:pH7.0在含有鐵離子濃度為8000mg/L的YPD培養(yǎng)基中30℃培養(yǎng)72h。高富集鋅菌株其與已發(fā)表尖孢鐮刀菌(fusarium oxysporum)的18s rDNA序列具有99%的同源性,初步鑒定為鐮刀菌屬(Fusarium),且形態(tài)學(xué)鑒定及生理生化特性均與該屬相符。

該菌株的發(fā)酵條件為:pH7.0在含鋅離子濃度為6000mg/L的PDA培養(yǎng)基中28℃培養(yǎng)72h。實(shí)驗(yàn)結(jié)果還發(fā)現(xiàn),高富集鐵菌株BY-1109可以在以肌醇為唯一碳源的培養(yǎng)基中生長較好,該特點(diǎn)與紅酵母屬不符,這需要進(jìn)一步研究以確定該菌是否為紅酵母屬的一個變種或者是一個新種。

3、實(shí)驗(yàn)分析了高富集鐵菌株將無機(jī)鐵轉(zhuǎn)化成有機(jī)鐵及鐵在細(xì)胞中的分布情況和結(jié)合狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:生長在加有硫酸亞鐵培養(yǎng)基中的高富集鋅菌株,其細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、液泡、線粒體和胞質(zhì)溶膠的鐵含量明顯高于生長在對照培養(yǎng)基的菌株,細(xì)胞壁、細(xì)胞膜和胞質(zhì)溶膠的鐵含量尤其高。說明鐵離子主要分布在細(xì)胞壁、細(xì)胞膜和胞質(zhì)溶膠,并與之結(jié)合形成有機(jī)態(tài)鐵。

4、實(shí)驗(yàn)研究了高富集鐵、高富集鋅菌株的生物利用度。將高富集鐵、高富集鋅菌株分別以10mg/Kg的劑量對大鼠進(jìn)行灌胃,測定其生物利用度。

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