背景[1-3]
沙氏葡萄糖瓊脂對照培養(yǎng)基又名SDA培養(yǎng)基或者沙氏培養(yǎng)基，英文名字是SabouraudDextroseAgar，是通用型的真菌培養(yǎng)基，屬于營養(yǎng)培養(yǎng)基中的一種，沙氏葡萄糖瓊Chemicalbook脂培養(yǎng)基屬于一種改性的沙氏瓊脂，主要用來培養(yǎng)和區(qū)分真菌，并且這種培養(yǎng)基一般會和抗生素一起使用，通過使用沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基可以將真菌和細菌材料中的病原體真菌分離出來。
沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基含糖量比較高，并且其PH值比較低，這種特性非常有利于真菌的生長，并且可以有效的抑制細菌的生長。通過沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)生長出的真菌可以保留其典型的形態(tài)學特征，也因此可以通過形態(tài)學特征的不同對菌種進行鑒定。
沙氏葡萄糖瓊脂對照培養(yǎng)基
檢驗原理：
葡萄糖提供碳源；動物組織的胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物提供氮源；瓊脂是凝固劑。
用法:稱取本品65.0g,加熱攪拌溶解于1000ml純化水中,121℃高壓滅菌15分鐘,冷卻至50℃左右時,傾入無菌平皿,備用。
應用[4][5]
用于申克孢子絲菌線粒體DNA型別與臨床分型的關系研究
用常規(guī)真菌學方法比較不同臨床型別的申克孢子絲菌分離株的真菌學特點,并了解申克孢子絲菌線粒體DNA分型,探索其線粒體DNA分型與臨床表現(xiàn)型之間的關系。
材料與方法一、實驗菌株47例皮膚型孢子絲菌病患者均來自于皮損處組織塊或膿汁培養(yǎng)的致病菌經(jīng)大培養(yǎng)菌落形態(tài)特征和小培養(yǎng)鏡下特點鑒定為申克孢子絲菌,其中男16例,女31例,年齡2～86歲;固定型24例,淋巴管型23例。
二、實驗試劑1、菌體培養(yǎng)基（1）沙氏葡萄糖蛋白胨瓊脂固體培養(yǎng)基（2）改良沙氏液基2、線粒體DNA提取試劑（1）EDTA緩沖液（2）破壁酶Zymolyase 100T（3）2-巰基乙醇（4）20%SDS（十二烷基磺酸鈉）（5）Tris飽和酚（6）氯仿、異丙醇、無水乙醇（7）TE緩沖液3、酶切及電泳試劑（1）HaeⅢ酶（2）RNase A酶（3）瓊脂糖（4）0.5×TBE儲存液；
三、主要實驗儀器1、蒸汽高壓消毒箱（美國Tuttnauer 2540MK型）2、PH4000AB型電熱恒溫培養(yǎng)箱（天津市泰斯特儀器有限公司）3、紫外凝膠成像系統(tǒng)（英國Gel WOrker eD,UVP GDS 8000）4、全能型高性能臺式冷凍離心機（德國Heaeus,Biofuge Stratos）5、05RP-22離心機（Hitachi提供）6、HZO-X100震蕩培養(yǎng)箱（哈爾濱市東聯(lián)電子開發(fā)有限公司）7、電泳儀（北京六一儀器廠,DYY-Ⅲ2型）8、電泳槽（北京六一儀器廠,DYY-Ⅲ2型）9、超聲細胞破碎儀（up 50H ultraschallprozessor）；
四、實驗方法1、菌株培養(yǎng)將47株分離菌株分別接種于沙氏葡萄糖蛋白胨瓊脂（SDA）固體培養(yǎng)基,2周后于菌體培養(yǎng)及鏡下觀察形態(tài)。
2、線粒體DNA提取3、限制性酶切4、瓊脂糖凝膠電泳并照相。
結果1、菌體培養(yǎng)將47株孢子絲菌病分離菌株接種于沙氏葡萄糖蛋白胨瓊脂固體培養(yǎng)基,觀察發(fā)現(xiàn)47株申克孢子絲菌菌株基本一致:（1）SDA固體培養(yǎng)基示:1周時呈直徑約0.5cm菌落,淡褐色或白色平滑酵母樣菌落,表面濕潤成膜狀。2周時菌落直徑約2cm,中央凹陷,周邊隆起,出現(xiàn)皺褶,呈深褐色。
（2）鏡下示:細長分隔菌絲,分生孢子柄多與菌絲呈直角生長,頂端著生梨形或卵圓形孢子,呈梅花瓣狀分布,并見孢子沿菌絲側(cè)生。
參考文獻
[1]Mitochondrial DNA Analysis of Sporothrix schenckii.Hiroshi Ishizaki.Jpn J Med Mycol.2003
[2]Rapid Identification of Dimorphic and Yeast-Like Fungal Pathogens Using Specific DNA Probes.Mark D Lindsley,Steven F,Hurst,et al.Journal of Clinical Microbiology.2001
[3]Mitochondrial DNA analysis of Sporothrix schenckii in South Africa and Australia.Ishizaki H,Kawasaki M,Aoki M,et al.Medical Mycology.2000
[4]Hybrid genotypes in the pathogenic yeast Cryptococcus neoformans.Boekhout T,Theelen B,Diaz M.et al.Microbiology.2001
[5]楊雪松.申克孢子絲菌線粒體DNA型別與臨床分型的關系[D].中國醫(yī)科大學,2008.