背景及概述^[3]

尿素別名碳酰二胺、碳酰胺、脲 。是由碳、氮、氧和氫組成的有機(jī)化合物，又稱脲（與尿同音）。其化學(xué)公式為 CON2H4、(NH2)2CO 或 CN2H4O，國(guó)際非專利藥品名稱為 Carbamide。外觀是白色晶體或粉末。它是動(dòng)物蛋白質(zhì)代謝后的產(chǎn)物，通常用作植物的氮肥。尿素在肝合成，是哺乳類動(dòng)物排出的體內(nèi)含氮代謝物。這代謝過(guò)程稱為尿素循環(huán)。尿素是種以人工合成無(wú)機(jī)物質(zhì)而得到的有機(jī)化合物。

檢測(cè)方法^[1-2]

報(bào)道一、

一種尿素濃度檢測(cè)方法，包括：

S1：制備標(biāo)準(zhǔn)溶液，利用購(gòu)買的尿素溶液或固體尿素配制一定濃度梯度的尿素標(biāo)準(zhǔn)溶液；

S2：配制顯色劑，所述顯色劑為含有一定濃度二乙酰一肟和硫代氨基脲的溶液；硫代氨基脲的加入，能夠使產(chǎn)物顏色穩(wěn)定、不易褪色，從而保證了測(cè)量精度，擴(kuò)大了線性動(dòng)態(tài)范圍，從而解決了現(xiàn)有的尿素濃度檢測(cè)方法顯色時(shí)間短、只能在實(shí)現(xiàn)室使用的缺陷；

S3：配制酸試劑，利用硫酸和磷酸配制酸試劑，磷酸和硫酸提供給溶液一定的緩沖區(qū)間，能夠緩沖溶液酸堿度的變化；

S4：測(cè)量不同濃度尿素標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線；

S5：將欲測(cè)量的尿素溶液與顯色劑和酸試劑混合反應(yīng)，測(cè)量產(chǎn)物的吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，計(jì)算出尿素濃度。

較優(yōu)的，所述步驟S1中，尿素標(biāo)準(zhǔn)溶液的溶劑為去離子水，濃度介于1-5mg/L。

具體的，例如可通過(guò)下述步驟配備標(biāo)準(zhǔn)溶液：

S11：在1L容量瓶中溶解0.1000g尿素于約800mL去離子水，加入0.1mL氯仿，加水定容稀釋至刻度，得到100ug/mL的母液；

S12：稀釋母液得到各濃度梯度的標(biāo)液。

本方法中，所配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液，既可以用于后期制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，也可以用于儀器的自動(dòng)校準(zhǔn)。

較優(yōu)的，所述顯色劑中，溶劑為去離子水，二乙酰一肟的濃度介于10g/L-20g/L，硫代氨基脲的濃度介于0.1g/L-0.2g/L。

具體的，例如可通過(guò)下述步驟配備顯色劑：

S21：配制二乙酰一肟溶液：稱取34.44g二乙酰一肟溶于800mL去離子水中，定容至1000mL，混勻后保存于棕色瓶，避光陰涼保存；

S22：配制硫代氨基脲溶液：稱取0.344g硫代氨基脲溶于1000mL去離子水中，混勻后保存于棕色瓶中；

S23：在500mL棕色瓶中，分別加入250mL二乙酰一肟和250mL硫代氨基脲溶液，混勻；有條件的，可以用140kpa高純氦氣脫氣1分鐘。顯色劑一般有效期20d左右。

較優(yōu)的，所述酸試劑中，溶劑為去離子水，硫酸的濃度介于500g/L-700g/L，磷酸的濃度介于150g/L-250g/L，且酸試劑中含有濃度介于0.03g/L-0.06g/L的氯化鐵，氯化鐵給溶液提供的三價(jià)鐵離子能夠避免反應(yīng)產(chǎn)生的羥胺干擾。

具體的，例如可通過(guò)下述步驟配備酸試劑：

S31：在1L燒杯中，緩緩加入327mL硫酸于約500mL去離子水中；

S32：再加入128mL的85%磷酸于硫酸-水溶液中；

S33：再加入0.055g氯化鐵，用去離子水定容至1000mL。

報(bào)道二、

一種乳中尿素定性檢測(cè)方法，包括如下所述的步驟。

a.配制濃度為20mg/ml尿素酶溶液，以及使用乙醇配制得到質(zhì)量含量為0.5%溴百里香酚藍(lán)乙醇溶液。例如在一種示意性實(shí)施方式中，稱取20mg尿素酶，加入1ml三級(jí)水，制成20mg/ml尿素酶溶液；稱取0.5g溴百里香酚藍(lán)，加入100ml乙醇，制成質(zhì)量含量約為0.5%溴百里香酚藍(lán)乙醇溶液。

b.使用奶粉和純水配制復(fù)原乳，其中所述奶粉和所述純水的質(zhì)量比為1:7，使用現(xiàn)有的方法準(zhǔn)確測(cè)量復(fù)原乳的尿素含量，以確保所述復(fù)原乳中尿素含量在正常范圍內(nèi)。例如在一種示意性實(shí)施方式中，稱取1g奶粉加入7ml三級(jí)水，渦旋混勻，制成復(fù)原乳，用酶解法檢測(cè)其中的尿素含量為0.25g/L。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，正常的牛乳中也含有尿素，尿素的含量一般在0.21~0.34g/L的范圍內(nèi)（J.S. jonker,  R.A. Kohn, R.A. Erdman, Using mile urea nitrogen to predict nitrogen excretion  and utilization efficiency in lactating dairy cows, Journal of Dairy Science,  1998,81(10):2682?2692）。

c.配制尿素溶液，向復(fù)原乳中添加制得的尿素溶液，使得復(fù)原乳中的尿素濃度增加0.2g/L，得到陽(yáng)性對(duì)照乳。例如在一種示意性實(shí)施方式中，稱取0.1g尿素，加入10ml三級(jí)水，制成10g/L尿素溶液；吸取980uL復(fù)原乳，加入20uL的10g/L尿素溶液，混勻，使得復(fù)原乳中尿素濃度增加0.2g/L，即得到尿素含量為0.45g/L陽(yáng)性對(duì)照乳。當(dāng)然也可以配制其他濃度的尿素溶液，只要改變加入尿素溶液的量，保證復(fù)原乳中尿素的濃度增加0.2g/L即可。

d.各取1mL待測(cè)乳和陽(yáng)性對(duì)照乳，離心處理后分別取上層清液，均加入40uL尿素酶溶液和20uL溴百里香酚藍(lán)乙醇溶液，渦旋混勻后分別得到待測(cè)乳清液和陽(yáng)性對(duì)照乳清液。例如在一種示意性實(shí)施方式中，各量取1ml待測(cè)乳和陽(yáng)性對(duì)照乳，以10000rpm高速離心20min；分別取離心后的上清液，然后均加入40uL尿素酶溶液和20uL溴百里香酚藍(lán)溶液，渦旋5s混勻，得到待測(cè)乳清液和陽(yáng)性對(duì)照乳清液。

e.將待測(cè)乳清液和陽(yáng)性對(duì)照乳清液靜止1min，并按照如下方法定性判斷待測(cè)乳清液中的尿素含量。

ea.若待測(cè)乳清的顏色比陽(yáng)性對(duì)照乳清液的顏色淺，則說(shuō)明待測(cè)乳中的尿素含量小于陽(yáng)性對(duì)照乳中的尿素含量。例如在一種示意性實(shí)施方式中，陽(yáng)性對(duì)照乳清液為藍(lán)色，待測(cè)乳清為黃綠色，說(shuō)明待測(cè)乳中的尿素含量小于陽(yáng)性對(duì)照乳中0.45g/L的尿素含量。

eb. 若待測(cè)乳清的顏色比陽(yáng)性對(duì)照乳清液的顏色深或顏色一致，則說(shuō)明待測(cè)乳中的尿素含量大于或等于陽(yáng)性對(duì)照乳中的尿素含量。

參考文獻(xiàn)

[1][中國(guó)發(fā)明]CN201610643294.9尿素濃度檢測(cè)方法及尿素濃度在線監(jiān)測(cè)設(shè)備

[2] [中國(guó)發(fā)明] CN201010597413.4 一種乳中尿素定性檢測(cè)方法

[3] A+醫(yī)學(xué)百科