背景[1-3]
NFKB誘導(dǎo)激酶抗體是可以特異性結(jié)合NFKB誘導(dǎo)激酶的一類多克隆抗體，主要用于體外檢測(cè)NFKB誘導(dǎo)激酶的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)。
細(xì)胞增殖在從發(fā)育到修復(fù)損傷組織等許多生理過(guò)程中起重要作用。多種機(jī)制參與細(xì)胞增殖的嚴(yán)謹(jǐn)調(diào)節(jié)。例如，原癌基因的活性可通過(guò)腫瘤抑制因子的作用來(lái)平衡；DNA損傷與修復(fù)的存在降低了基因突變和細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的風(fēng)險(xiǎn)；免疫系統(tǒng)可以識(shí)別并清除癌癥細(xì)胞。穩(wěn)態(tài)調(diào)控機(jī)制的持續(xù)性被破壞必然導(dǎo)致細(xì)胞增殖過(guò)度從而形成癌癥。
NFKB誘導(dǎo)激酶免疫組化圖
NFkB1和NFkB2是轉(zhuǎn)錄因子Rel/NFkB家族的成員，此家族還包括RelA、c-Rel和RelB。Rel/NFkB家族調(diào)控了參與免疫、凋亡和致癌過(guò)程的基因的表達(dá)。NFkB主要存在于細(xì)胞質(zhì)中，并與抑制性的IkB蛋白形成復(fù)合物，當(dāng)IkB磷酸化之后，NFkB被釋放，并轉(zhuǎn)位到細(xì)胞核。NFkB1（105 kDa）和NFkB2（100 kDa）在合成時(shí)均為前體分子，可被蛋白水解為50和52 kDa的活性亞基。
NFkB似乎在凋亡和細(xì)胞存活上有著矛盾的功能。NFkB通過(guò)抑制p53依賴的凋亡和上調(diào)Bcl-2家族的抗凋亡成員和caspase抑制劑（如XIAP和FLIP），介導(dǎo)了許多信號(hào)的存活反應(yīng)。相反，NFkB也被DNA損傷中的凋亡刺激所激活，介導(dǎo)了促凋亡基因（如TRAIL R2/DR5、Fas和Fas配體）的上調(diào)。
應(yīng)用[4][5]
用于p55PIK/NFκB通路在炎癥調(diào)控中的作用及機(jī)制研究
磷脂酰肌醇-3-激酶蛋白家族（PI3Ks）蛋白同免疫反應(yīng)密切相關(guān),其調(diào)節(jié)亞單位和催化亞單位的表達(dá)缺失或應(yīng)用相應(yīng)的PI3Ks抑制劑能夠?qū)γ庖叻磻?yīng)產(chǎn)生顯著影響。其中,IA類PI3Ks調(diào)節(jié)亞單位能夠通過(guò)其i-SH2結(jié)構(gòu)域同相應(yīng)的催化亞單位形成二聚體結(jié)構(gòu),進(jìn)而調(diào)控催化亞單位的激酶活性。
目前關(guān)于IA類PI3Ks亞單位對(duì)免疫反應(yīng)尤其是炎癥反應(yīng)的調(diào)控作用存在較多爭(zhēng)議,本論文旨在明確IA類PI3Ks調(diào)節(jié)亞單位p55PIK對(duì)炎癥反應(yīng)的調(diào)控作用,初步探討蛋白p55PIK對(duì)炎癥反應(yīng)的調(diào)控作用的機(jī)制。
方法：擴(kuò)增并純化表達(dá)蛋白p55PIK的腺病毒載體,在HaCat細(xì)胞內(nèi)高表達(dá)蛋白p55PIK;通過(guò)在PMA誘導(dǎo)后的THP1細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)染蛋白p55PIK特異性的siRNA,降低蛋白p55PIK的表達(dá)。通過(guò)單獨(dú)影響蛋白p55PIK的表達(dá)或者再次給予LPS（脂多糖）刺激,通過(guò)Q-PCR檢測(cè)相應(yīng)促炎細(xì)胞因子TNF-α,IL-1β,IL-6的轉(zhuǎn)錄水平的變化；通過(guò)ELISA試驗(yàn)檢測(cè)相應(yīng)促炎細(xì)胞因子TNF-α,IL-1β,IL-6的蛋白水平的變化；通過(guò)VWestern Blot檢測(cè)]VFκB信號(hào)通路,PI3K/AKT通路,IKK信號(hào)通路以及MAPK信號(hào)通路的激活情況。
結(jié)果：成功擴(kuò)增并純化表達(dá)蛋白p55PIK的腺病毒載體,成功篩選出蛋白p55PIK特異性的siRNA。在HaCat細(xì)胞內(nèi)單獨(dú)高表達(dá)p55PIK或者再次給予LPS刺激后均能夠顯著促進(jìn)炎癥因子轉(zhuǎn)錄和翻譯（P<0.05）,能夠激活NFκB信號(hào)通路和PI3K/AKT通路,但對(duì)IKK信號(hào)通路以及MAPK信號(hào)通路無(wú)明顯影響；在THP1細(xì)胞內(nèi)單獨(dú)低表達(dá)p55PIK或者再次給予LPS刺激后均能夠顯著抑制炎癥因子轉(zhuǎn)錄和翻譯（P<0.05）,能夠抑制NFκB信號(hào)通路和PI3K/AKT通路的激活,但對(duì)IKK信號(hào)通路以及MAPK信號(hào)通路無(wú)明顯影響。
參考文獻(xiàn)
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