背景^[1-3]

BAX(小鼠來源抗體)以人工合成的Bax氨基端(Amino-terminal)的一段多肽為抗原制備而成的抗Bax小鼠單克隆抗體?？寺√?hào)為6A7(Clone6A7)，是應(yīng)用最廣的Bax抗體?？贵w類型為Mouse IgG1。

本Bax抗體可以檢測(cè)內(nèi)源性水平的Bax，未發(fā)現(xiàn)和其它Bcl-2家族蛋白有交叉反應(yīng)。Bax是一種促凋亡蛋白，上調(diào)Bax蛋白水平可以促進(jìn)細(xì)胞凋亡。在通過線粒體應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中Bax起關(guān)鍵作用。

bax基因是人體最主要的凋亡基因，屬于bcl-2基因家族，編碼的Bax蛋白可與Bcl-2形成異二聚體，對(duì)Bcl-2產(chǎn)生阻抑作用。研究發(fā)現(xiàn)Bax/Bcl-2兩蛋白之間的比例關(guān)系是決定對(duì)細(xì)胞凋亡(Apoptosis)抑制作用強(qiáng)弱的關(guān)鍵因素，因此認(rèn)為，bax是極重要的促細(xì)胞凋亡(Apoptosis)基因之一。

Bax可以形成寡聚體，然后從細(xì)胞漿中轉(zhuǎn)移到線粒體膜上；通過和線粒體膜上的一些pore proteins相互作用，增強(qiáng)線粒體的通透性(permeability)；最后導(dǎo)致細(xì)胞色素c釋放(cytochrome c release)、caspase-9激活以及后續(xù)的其它c(diǎn)aspase激活和最終的細(xì)胞凋亡。Bax可以和Bcl-2形成多聚體，來調(diào)節(jié)線粒體膜的通透性，最終調(diào)節(jié)細(xì)胞的凋亡或存活。

試驗(yàn)中適用組織為石蠟切片，其陽性部位為細(xì)胞漿，陽性對(duì)照為乳腺癌，組織處理為熱修復(fù)。BAX是與BCL-2同源的水溶性相關(guān)蛋白，是BCL-2基因家族中細(xì)胞凋亡促進(jìn)基因，BAX的過度表達(dá)可拮抗BCL-2的保護(hù)效應(yīng)而使細(xì)胞趨于死亡。目前多和BCL-2一起用于腫瘤的研究。

應(yīng)用^[4][5]

用于胰島素受體底物1通過PI3K/Akt通路下調(diào)大鼠成骨細(xì)胞NFκB和BAX表達(dá)促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖研究

Bcl2（B-cell lymphoma2,Bcl2）家族長(zhǎng)久以來被認(rèn)為是凋亡主要調(diào)節(jié)機(jī)制，其中Bcl2抑制凋亡，BAX促進(jìn)凋亡，二者獨(dú)立調(diào)節(jié)凋亡。研究發(fā)現(xiàn)糖尿病大鼠凋亡顯著增加。糖尿病時(shí)，高糖環(huán)境引起細(xì)胞損傷，BAX激活和引起其他促凋亡蛋白如細(xì)胞色素C釋放。1型糖尿病小鼠骨中成骨細(xì)胞凋亡增加。一些研究表明IRS1具有抗凋亡能力，IRS1可通過調(diào)節(jié)Bcl2調(diào)控凋亡。研究組前期試驗(yàn)顯示2型糖尿病合并骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病可能與骨組織IGF1、IRS1、IRS2表達(dá)受抑制有關(guān)，同時(shí)可能與骨組織PI3K、Akt表達(dá)降低、NFκB表達(dá)升高有關(guān)。

方法：1提取Wister大鼠肝臟RNA，逆轉(zhuǎn)錄生成cDNA。根據(jù)NCBI提供的IRS1基因編碼序列，委托DNA合成公司合成帶適當(dāng)酶切位點(diǎn)的引物，以cDNA作為模板合成IRS1，插入pEGFP-N1質(zhì)粒，獲得過表達(dá)IRS1的表達(dá)載體。體外轉(zhuǎn)染人Hela細(xì)胞。

2酶消化聯(lián)合組織塊法體外培養(yǎng)Wister大鼠成骨細(xì)胞，倒置顯微鏡下觀察成骨細(xì)胞形態(tài)，傳代至第二代時(shí)茜素紅染色鑒定成骨細(xì)胞。傳代至第二代時(shí)pEGFP-N1-IRS1表達(dá)載體脂質(zhì)體法LipofectamineTM2000瞬時(shí)轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞，同時(shí)應(yīng)用PI3K激酶特異性抑制劑LY294002阻斷PI3K/Akt通路，免疫熒光和Western blotting法觀察成骨細(xì)胞NFκB表達(dá)變化。

3酶消化聯(lián)合組織塊法體外培養(yǎng)Wister大鼠成骨細(xì)胞，傳代至第二代時(shí)pEGFP-N1-IRS1脂質(zhì)體法LipofectamineTM2000瞬時(shí)轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞，同時(shí)應(yīng)用LY294002阻斷PI3K/Akt通路，觀察成骨細(xì)胞IRS1/PI3K/Akt通路及BAX的表達(dá)變化。同時(shí)檢測(cè)成骨細(xì)胞細(xì)胞周期。

參考文獻(xiàn)

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