背景[1-3]
anti-Lamin B1是以anti-Lamin B為抗原的免疫蛋白，可以特異性結(jié)合anti-Lamin B，主要用于檢測anti-Lamin B的Western blotting、Immunohistocry、ELISA、IF、IHC-P、IHC-F等生物實驗。
Lamin B1是一種蛋白質(zhì),在人類由LMNB1基因編碼，核纖層由位于內(nèi)核膜旁邊的蛋白質(zhì)的二維基質(zhì)組成,層系蛋白家族構(gòu)成基質(zhì)并在進化過程中高度保守的。在有絲分裂過程中,板矩陣是可逆拆卸核纖層蛋白蛋白質(zhì)磷酸化。核纖層蛋白的蛋白質(zhì)被認為是參與核穩(wěn)定、染色質(zhì)結(jié)構(gòu)和基因表達。脊椎動物核纖層蛋白包括兩種類型,A和B,這個基因編碼的兩個B型蛋白質(zhì)B1。核纖層蛋白B和異染色質(zhì),固定在核膜的內(nèi)表面的核纖層蛋白B受體。
核纖層蛋白是核纖層的結(jié)構(gòu)部件，用于支撐核被膜并參與細胞周期中核被膜的解體和再形成。在動物細胞中，3種基因編碼了至少7種核纖層蛋白。LMNA基因通過可變剪接編碼A型和C型核纖層蛋白，而LMNB1和LMNB2分別編碼核纖層蛋白B1和B2。B型核纖層蛋白存在于每個細胞。A型核纖層蛋白在原腸胚形成后表達，C型核纖層蛋白的表達是組織特異性的。在核纖層蛋白中，核纖層蛋白B1往往被用作內(nèi)參。核纖層蛋白B1在物種間是高度保守的。分子量為66Kd，適合補充使用。
應(yīng)用[4][5]
用于Cav1.3鈣離子通道蛋白和LaminB1核纖層蛋白在大鼠耳蝸發(fā)育階段的表達及作用研究
新生SD大鼠耳蝸血管紋邊緣細胞原代培養(yǎng)及Cav1.3、LaminB1蛋白的表達目的:建立新生大鼠耳蝸血管紋邊緣細胞(MCs)體外培養(yǎng)體系,探討Cav1.3鈣離子通道蛋白、LaminB1核纖層蛋白在原代培養(yǎng)的新生大鼠邊緣細胞中是否表達。方法:選用新生Sprague Dawley乳鼠(p0-p3)為實驗對象,斷頭處理后在解剖顯微鏡下分離外側(cè)壁,眼科剪剪切成微小的組織塊,利用酶消化法將細胞懸液接種在六孔板上。利用含2%胎牛血清的動物上皮培養(yǎng)基培養(yǎng),隔天換液。吹打純化后制成細胞爬片,采用免疫熒光法檢測上皮細胞特異性角蛋白CK-18、Cav1.3鈣離子通道蛋白、LaminB1核纖層蛋白的表達。
結(jié)果:倒置光學(xué)顯微鏡下,24小時內(nèi)可見大部分接種的細胞團塊貼壁良好。培養(yǎng)第4-5天時,多角形的邊緣細胞和梭形的成纖維細胞混合生長。MCs呈多角形,大小不一,顏色較暗,界限清楚,細胞之間連接緊密,形成典型的鋪路石樣外觀。7-9天時,數(shù)百個多角形的邊緣細胞以及周圍的液體區(qū)域形成“dome”結(jié)構(gòu)。14天后,多角形細胞體積變大,胞質(zhì)內(nèi)顆粒樣物質(zhì)增多,出現(xiàn)多核或者大核,細胞骨架明顯,直至崩解。
免疫細胞化學(xué)法檢測細胞角蛋白CK-18、Cav1.3鈣離子通道蛋白、LaminB1核纖層蛋白表達陽性。結(jié)論:成功建立了新生大鼠血管紋邊緣細胞體外培養(yǎng)體系,為研究邊緣細胞的生理功能奠定了技術(shù)基礎(chǔ)。經(jīng)過免疫細胞化學(xué)實驗首次證實了新生大鼠的邊緣細胞具有表達Cav1.3鈣離子通道蛋白、LaminB1核纖層蛋白的能力,初步揭示了Cav1.3、LaminB1在耳蝸發(fā)育中扮演一定的角色,為后續(xù)實驗奠定了理論基礎(chǔ)。
參考文獻
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[5]杜智會.Cav1.3鈣離子通道蛋白和LaminB1核纖層蛋白在大鼠耳蝸發(fā)育階段的表達及作用[D].華中科技大學(xué),2019.