背景[1-3]
RAT ANTI C-MYC是一類可以特異性結合ANTI-C-MYC的抗大鼠多克隆抗體，主要用于檢測大鼠模型ANTI-C-MYC的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多種免疫學實驗。
檢測原理：雙抗體夾心法測定標本中ANTI-C-MYC水平。用純化的ANTI-C-MYC抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入ANTI-C-MYC，再與HRP標記的ANTI-C-MYC抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的ANTI-C-MYC呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中ANTI-C-MYC濃度。
c-myc基因是myc基因家族的重要成員之一，c-myc基因既是一種可易位基因，又是一種多種物質調節(jié)的可調節(jié)基因，也是一種可使細胞無限增殖，獲永生化功能，促進細胞分裂的基因，myc基因參于細胞凋零，c-myc基因與多種腫瘤發(fā)生發(fā)展有關。
C-myc基因的產物為62KD的磷酸化蛋白P62c-mgc，是由C-myc基因的外顯子2和3共同編碼的由439個氨基酸組成的蛋白質，定位細胞核內，為核蛋白，依C-one編碼產物，功能分類，C-myc癌基因屬核蛋白基因，具有轉化細胞的能力，并具有與染色體、DNA結合的特性，在調節(jié)細胞生長、分化及惡性轉化中發(fā)揮作用。
C-Myc蛋白在結構上可分為轉錄激活區(qū)，非特異DNA結合區(qū)，核靶序列，堿性區(qū)，螺旋一環(huán)一螺旋(HLH)及亮氨酸拉鏈區(qū)，在已知的轉錄因子中可介導蛋白的寡聚化，這兩個區(qū)同時存在是C-myc蛋白所特有的，在其它蛋白質中，很少發(fā)現(xiàn)。在C-Myc蛋白中，螺旋一環(huán)一螺旋緊隨著堿性區(qū)，揭示其以特異性序列方式和DNA相互作用
應用[4][5]
用于基于c-Myc/CLIC4通路探究脂多糖致大鼠海馬損傷的致病機制研究
通過建立內毒素血癥模型,從組織水平、細胞水平及分子水平三個層次探究LPS致海馬損傷的發(fā)生發(fā)展機制。
應用CRISPR/Cas9基因編輯技術對PC12細胞進行基因編輯,從而驗證c-Myc/CLIC4通路在LPS誘導PC12細胞凋亡中的作用機制。為LPS致海馬損傷的發(fā)病機制提供新思路,并為今后臨床開展內毒素血癥致海馬損傷的治療及進行相關的機制研究提供理論依據(jù)及試驗基礎。
在體試驗選取36只健康雄性SD大鼠,隨機均分為CON組和LPS組。LPS組腹腔注射1 mL/kg LPS(10 mg/mL),CON組腹腔注射1 mL/kg生理鹽水。造模4 h后經(jīng)心臟采血并處死大鼠,開顱,分離大腦皮層后取海馬備用。
通過檢測大鼠血清中相關炎癥指標,觀察海馬組織病理學變化,觀察海馬超微組織結構變化,檢測線粒體途徑凋亡相關蛋白表達量,以及檢測c-Myc/CLIC4通路的mRNA水平及蛋白表達量,闡明線粒體凋亡途徑在LPS致海馬損傷中的致病機制,并探究c-Myc/CLIC4通路是否參與對線粒體凋亡途徑的調控。
體外試驗中,選用PC12細胞,分成5組,分別為CON組,LPS組,sgc-Myc組,sgCLIC4組,sgCON組。sgc-Myc組,sgCLIC4組細胞分別用CRISPR/Cas9基因編輯技術編輯c-Myc基因、CLIC4基因。
并做如下處理:CON組更換新完全培養(yǎng)基;其他各組更換含200μg/mL LPS的完全培養(yǎng)基。應用流式細胞術,Annexin V-FITC及Western blot等方法檢測敲除c-Myc及CLIC4基因后細胞凋亡水平的變化,從而證實c-Myc/CLIC4通路對線粒體凋亡途徑的調控作用。
參考文獻
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[4]The Role of Interleukin-6 in Castleman Disease[J].Kazuyuki Yoshizaki,Shinichi Murayama,Hiroki Ito,Tomohiro Koga.Hematology/Oncology Clinics of North America.2018(1)
[5]李蓓.基于c-Myc/CLIC4通路探究脂多糖致大鼠海馬損傷的致病機制[D].東北農業(yè)大學,2019.