9035-81-8
中文名稱
胰酶抑制劑
英文名稱
Trypsin inhibitor
CAS
9035-81-8
分子式
NULL
更新日期
2024/12/26 21:46:18
基本信息
中文別名
胰酶抑制劑胰蛋白酶抑制劑
胰酶抑制劑II-S型
胰蛋白酶抑制劑(利馬豆)
胰蛋白酶抑制劑 來(lái)源于大豆
胰蛋白酶抑制劑/胰酶抑制劑
胰蛋白酶抑制劑 來(lái)源于雞蛋白
胰蛋白酶抑制劑 來(lái)源于牛胰腺
胰蛋白酶抑制劑 來(lái)源于火雞蛋白
胰蛋白酶抑制劑(大豆)(+4℃)
英文別名
iniprolSBTI/STI
contrykal
APROTINIUM
Trypsin inhibitor
Ovomucoid-Agarose
EZNA KIT MICRO RNA
Trypsin Inhibitor So
KUNITZ TRYPSIN INHIBITOR
TRYPSIN INHIBITOR CHICKEN
所屬類別
生物化學(xué)品: 多肽及蛋白質(zhì)類: 消化道激素物理化學(xué)性質(zhì)
外觀性狀本品是從牛胰、肺、腮等組織中提取的激肽釋放酶抑制劑，本身不是酶，由58個(gè)氨基酸殘基組成的堿性多肽，整個(gè)分子呈梨形，活性中心為賴氨酸。它能與多種蛋白酶的活動(dòng)中心競(jìng)爭(zhēng)一個(gè)賴氨?；种破浠顒?dòng)。
本品為白色或微黃色粉末，無(wú)臭，溶于水，有可透析性，等電點(diǎn)為10-10.5。對(duì)高溫、酸、堿和酶都很穩(wěn)定。在稀酸中加熱至100℃，pH12.6時(shí)室溫放置24h仍穩(wěn)定，但pH12.8時(shí)活力開(kāi)始下降。在60-80℃能被嗜熱蛋白酶消化，其他酶不能使其失活。
本品為白色或微黃色粉末，無(wú)臭，溶于水，有可透析性，等電點(diǎn)為10-10.5。對(duì)高溫、酸、堿和酶都很穩(wěn)定。在稀酸中加熱至100℃，pH12.6時(shí)室溫放置24h仍穩(wěn)定，但pH12.8時(shí)活力開(kāi)始下降。在60-80℃能被嗜熱蛋白酶消化，其他酶不能使其失活。
儲(chǔ)存條件2-8°C
溶解度H2O: >10 mg/mL
形態(tài)solution
顏色White to off-white
PH值<7.4
水溶解性Soluble in water (10 mg/ml), phosphate buffers (10 mg/ml), and balanced salt solutions (1 mg/ml).
安全數(shù)據(jù)
警示詞危險(xiǎn)
危險(xiǎn)性描述H317-H334
防范說(shuō)明P261-P272-P280-P284-P302+P352-P333+P313
危險(xiǎn)品標(biāo)志Xn
危險(xiǎn)類別碼42/43
安全說(shuō)明22-36/37-45-23
WGK Germany3
海關(guān)編碼35040090
制備方法
方法1
方法一、牛肺為原料提取、鹽析 將新鮮或冰凍牛肺絞碎后，用5倍量水?dāng)噭颍?.5mol/L硫酸調(diào)節(jié)pH為2，攪拌提取8h，過(guò)濾，濾渣同法再提取1次，合并兩次提取液，每升加硫酸銨277g，用5mol/L硫酸調(diào)pH為1.5，放置過(guò)夜。
新鮮牛肺（或冰凍[水, H2SO4]→[pH2, 8h]提取液[(NH4)2SO4]→[pH1.5]鹽析物
去雜蛋白 將鹽析物除去上清液，過(guò)濾，濾液用氫氧化鈉液調(diào)pH至5.5，再每升加硫酸銨255g，攪勻后靜置48h，過(guò)濾，得鹽析物。用9倍量水溶解鹽析物，攪拌2h后，置冰箱過(guò)夜，過(guò)濾，濾液中加入1/20量的三氯乙酸 (50%)，速加熱至80℃后，即冷卻至30℃以下，過(guò)濾。
鹽析物[(NH4)2SO4]→[pH5.5, 48h]鹽析物[三氯乙酸]→[先80℃, 后30℃]濾液
鹽析、溶解、鹽析 濾液用氫氧化鈉(5mol/L)調(diào)pH為3，按每升加入硫酸銨610g攪拌使溶解，靜置過(guò)夜。取沉淀物，用4倍量新配制的pH5.5的 0.1mol/L乙酸鈉緩沖液和1倍量0.4mol/L硼酸緩沖液溶解，按每升加入硫酸鎂 1050g溶解，過(guò)夜，次日過(guò)濾，析出鹽析物。
濾液[NaOH, (NH4)2SO4]→[pH3]沉淀物[NaAc,硼酸緩沖液，MgSO4]→[pH5.5]鹽析物
透析、脫鹽、沉淀 加4倍量水使鹽析出物溶解，用流動(dòng)自來(lái)水于10℃以下透析24h，加硅藻土過(guò)濾，濾液用強(qiáng)堿性季銨I型陰離子交換樹(shù)脂201×7與強(qiáng)酸性苯乙烯系陽(yáng)離子交換樹(shù)脂001×7(按201×7樹(shù)脂：001×7樹(shù)脂=3:1的比例)攪拌吸附20min，至無(wú)硫酸根離子。將樹(shù)脂濾過(guò)，脫鹽液(pH7左右)加0.9%氯化鈉和1.5倍量丙酮析出沉淀，過(guò)濾，濾液再加4倍量丙酮析出沉淀，過(guò)夜。然后沉淀用丙酮、乙醚洗滌，干燥。
鹽析物[水]→[10℃以下]濾液[陰離子、陽(yáng)離子樹(shù)脂]→脫鹽液[NaCl, 丙酮]→[pH7]沉淀物
去熱原、沉淀、干燥 沉淀物用60倍量80%甲醇溶液溶解，于冰浴攪拌2h，過(guò)濾，按濾液體積的1%加30%的氯化鈉溶液和5倍量丙酮，沉淀過(guò)夜，離心，用丙酮洗滌，干燥，得沉淀物。再用60倍量無(wú)熱原水溶解，5mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至11，置冰箱中4d，過(guò)濾，濾液用冰醋酸調(diào)為pH 4-5后，加入1%量的300g/L氯化鈉溶液和5倍量丙酮，析出沉淀，過(guò)夜，用丙酮、乙醚洗滌，干燥，即得成品。
沉淀物[蒸餾水，NaOH]→[pH11]無(wú)熱原液[冰HAc, NaCl, 丙酮]→[pH4-5]成品
方法二、以人尿?yàn)樵系娜四蛞鹊鞍酌敢种苿?UTI)提取法
原料處理、酸化 取新鮮男性尿100L<操作全過(guò)程在0-4℃下進(jìn)行)，經(jīng)雙層紗布過(guò)濾，用1mol/L NaOH液調(diào)節(jié)pH至8.5，得白色絮狀沉淀物，靜置2h，棄去沉淀得上清液，攪拌下緩緩滴加1mol/L HCl調(diào)pH4.0，生成細(xì)微沉淀，離心20min，除沉淀得酸化尿液。
男性人尿[1mol/L NaOH]→[pH8.5]上清液[1mol/L HCl]→[pH4.0]酸化尿液
吸附、洗脫 取Polyerde Ⅳ500g加入酸化尿液中，攪拌吸附2h，過(guò)濾，棄去濾液，吸附劑用常水洗滌至白色，再用2 mol/L NH4HCO3液4L進(jìn)行洗脫，收集洗脫液。
酸化尿液[Polyerde IV]→吸附物[2 mol/L NH4HCO3]→洗脫液
鹽析、透析、濃縮、干燥 將固體(NH4)2SO4加入洗脫液中，達(dá)80%飽和度，于4℃下靜置4-5h，離心30min，收集沉淀，再將沉淀溶于適量的蒸餾水中，加磷酸鹽緩沖液透析至鹽除盡，得透析液。將透析液濃縮，冷凍干燥，即得UTI成品。
洗脫液[(NH4)2SO4, 磷酸鹽緩沖液]→[4℃, 蒸餾水]透析液[（濃縮，冷凍）]→UTI成品。
應(yīng)用領(lǐng)域
參考質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
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原料藥
中國(guó)藥典2000版280頁(yè)
指標(biāo)名稱
指標(biāo)
指標(biāo)名稱
指標(biāo)
效價(jià)/≥3.0單位/mg
熱原/符合規(guī)定
pH值
5.0-7.0
異常毒性
符合規(guī)定
降壓物質(zhì)
符合規(guī)定
水分
≤6.0％
注射凍干品
中國(guó)藥典2000版280頁(yè)
指標(biāo)名稱
指標(biāo)
指標(biāo)名稱
指標(biāo)
含量
≥85%
熱原
符合規(guī)定
pH值
5.0-7.0
降壓物質(zhì)
符合規(guī)定
水分
≤7.0%
其他
符合規(guī)定
常見(jiàn)問(wèn)題列表
簡(jiǎn)介
胰蛋白酶抑制劑（Trypsin inhibitor，TI）是抑制胰蛋白酶的絲氨酸蛋白酶抑制劑，是大豆中主要的一類抗?fàn)I養(yǎng)因子，它對(duì)植物本身具有保護(hù)作用，可防止大豆籽粒自身發(fā)生分解代謝。大豆胰蛋白酶抑制劑是一種多肽類或是蛋白質(zhì)，根據(jù)氨基酸殘基組成及差異性質(zhì)被分為不同種類。目前從大豆中被分解出且研究較多的胰蛋白酶抑制劑主要有兩種，分別為Kunitz型胰蛋白酶抑制劑（KTI）和Bowman-Birk型胰蛋白酶抑制劑（BBI）。
KTI由181個(gè)氨基酸組成(圖1)，含有四個(gè)半胱氨酸，相互形成兩個(gè)二硫鍵，反應(yīng)中心位于63號(hào)精氨酸與64號(hào)異亮氨酸之間，KTI主要對(duì)胰蛋白酶起到特異性的抑制作用，是主要的胰蛋白酶抑制因子。
BBI含有大量的半胱氨酸，其顯著特點(diǎn)是具有兩個(gè)獨(dú)立的反應(yīng)中心（圖2黑色部分），一個(gè)位于第16號(hào)賴氨酸與第17號(hào)絲氨酸之間，特異性與胰蛋白酶結(jié)合；另一個(gè)位于第43號(hào)亮氨酸與第44號(hào)絲氨酸之間，特異性與糜蛋白酶結(jié)合。因此BBI能夠同時(shí)抑制胰蛋白酶和糜蛋白酶活性。BBI結(jié)構(gòu)非常穩(wěn)定，不易通過(guò)加熱破壞。
鈍化方法
1. 熱處理 熱處理效果受到大豆品種、含水量、加熱溫度等因素影響。加熱不足達(dá)不到破壞胰蛋白酶抑制劑活性的目的，而加熱過(guò)度會(huì)使氨基酸，特別是賴氨酸、精氨酸和胱氨酸等受到破壞，還會(huì)使多種氨基酸如蛋氨酸、異亮氨酸和賴氨酸等消化率降低。2. 化學(xué)處理 化學(xué)處理一般都是利用化學(xué)物質(zhì)破壞胰蛋白酶抑制劑的二硫鍵，從而改變胰蛋白酶抑制劑的分子結(jié)構(gòu)達(dá)到滅活的目的。主要采用的化學(xué)物質(zhì)有亞硫酸鈉、偏重亞硫酸鈉、硫酸亞鐵以及一些帶有硫醇基的化合物。但用化學(xué)法處理后會(huì)存在試劑殘留，對(duì)原料有不良影響。
3. 超聲波處理 在超聲波場(chǎng)的作用下，使胰蛋白酶抑制劑的分子結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，從而影響其活性。但是超聲設(shè)備成本較高，不適合小規(guī)模生產(chǎn)廠家使用。同時(shí)，產(chǎn)生振動(dòng)也會(huì)導(dǎo)致一部分蛋白質(zhì)變性，降低整體營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。
4. 生物處理 較為常見(jiàn)的生物處理有微生物發(fā)酵法和酶解法。某些微生物（如乳酸菌、枯草芽孢桿菌等）產(chǎn)生的特異性酶對(duì)大豆中的胰蛋白酶抑制劑有一定的滅活效果，通過(guò)微生物發(fā)酵可以降低大豆中胰蛋白酶抑制劑活性。胰蛋白酶抑制劑本身是一種蛋白質(zhì)，因此也可以通過(guò)蛋白酶酶解使其失活。酶解法相對(duì)于其他處理方法來(lái)說(shuō)成本較低，且酶是一種天然產(chǎn)物，安全性高，不會(huì)對(duì)人體或動(dòng)物健康造成不良影響，使用酶進(jìn)行處理可以確保產(chǎn)品的安全性和可靠性。