9027-96-7
中文名稱
鄰氯苯亞甲基丙二腈
英文名稱
CITRATE SYNTHASE
CAS
9027-96-7
分子式
C6H5O7-3
分子量
189.1
MOL 文件
9027-96-7.mol
更新日期
2025/01/23 08:45:41
9027-96-7 結(jié)構(gòu)式
基本信息
中文別名
檸檬酸合酸檸檬酸合酶
鄰氯苯亞甲基丙二腈
鄰氯苯亞甲基丙二睛
鄰氯苯亞甲基丙二氰腈
檸檬酸合酶 來源于豬心臟
小鼠檸檬酸合成酶(CS)ELISA試劑盒
檸檬酸合酶(CITRATE SYNTHASE,CS)試劑盒
英文別名
CS-CS
-SP
EC 4.1.3.7
CITRATE SYNTHASE
Synthase, citrate
CITRATE OXALOACETATELYASE
CITRATE CONDENSING ENZYME
CITRATE SYNTHASE USP/EP/BP
Native Pigeon Citrate Synthase
所屬類別
生物化工：多糖物理化學(xué)性質(zhì)
外觀性狀本品是從動物的軟骨組織中得到的酸性黏多糖，為灰白色無定型粉末，略帶咸味；無臭；有引濕性；水溶液具黏稠性，加熱不凝結(jié)。在水中易溶，在乙醇、丙酮或冰醋酸中不溶。
注射液為硫酸軟骨素鈉鹽的滅菌水溶液，為幾乎無色的澄明液體。
硫酸軟骨素按其化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)的差異，又分為A、B、C、D、E、F、H等多種，其中B、F、H分子中含L-艾杜糖醛酸。B不被玻璃酸酶降解，顯色反應(yīng)與A不同，B稱為硫酸皮膚素，在皮膚中較多。藥用硫酸軟骨素是從動物軟骨中提取的，主要是A、C及各種硫酸軟骨素的混合物。它具有澄清脂質(zhì)和提高機(jī)體解毒功能，還具有利尿和鎮(zhèn)痛等作用，對膠原性疾患有效，對由鏈霉素引起的聽覺障礙也有效。
注射液為硫酸軟骨素鈉鹽的滅菌水溶液，為幾乎無色的澄明液體。
硫酸軟骨素按其化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)的差異，又分為A、B、C、D、E、F、H等多種，其中B、F、H分子中含L-艾杜糖醛酸。B不被玻璃酸酶降解，顯色反應(yīng)與A不同，B稱為硫酸皮膚素，在皮膚中較多。藥用硫酸軟骨素是從動物軟骨中提取的，主要是A、C及各種硫酸軟骨素的混合物。它具有澄清脂質(zhì)和提高機(jī)體解毒功能，還具有利尿和鎮(zhèn)痛等作用，對膠原性疾患有效，對由鏈霉素引起的聽覺障礙也有效。
儲存條件2-8°C
溶解度在水中的溶解度為1.0mg/mL，澄清
形態(tài)ammonium sulfate suspension
生物來源Porcine heart
水溶解性H2O: soluble 1.0mg/mL, clear
Specific Activity≥100units/mg protein
制備方法
方法1
方法一、稀堿-酶解提取法浸出 取20g/L(2%)NaOH溶液250kg，置浸泡缸內(nèi)，加入潔白干燥軟骨40kg，在室外溫下每隔半小時緩緩攪拌1次，待浸出液相對密度達(dá)5°Be (20℃)時出料，用紗布過濾，骨渣再用適量蒸餾水浸泡20min，過濾，合并2次濾液，總體積為200L，得浸出液。
豬喉（鼻）軟骨[NaOh]→[室溫]浸出液
酶解 取浸出液置于消化罐中，攪拌下緩緩加入等體積鹽酸并調(diào)pH8.8-9，循環(huán)水浴上加熱，內(nèi)溫達(dá)到50℃時加入相當(dāng)于1：25倍胰酶1300g(宜用高倍胰酶)，繼續(xù)升溫，控制消化溫度為53-54℃，共計7h。在水解過程中，由于氨基酸的增加，使pH下降，需用100g/L(10%)NaOH溶液調(diào)整pH8.8-9。水解終點檢查，取少許反應(yīng)液過濾于比色管中，10ml濾液滴加100 g/L(10%)三氯乙酸1-2滴，若微顯渾濁，說明消化良好，否則酌情增加胰酶。
浸出液[HCl, 胰酶]→[pH8.8-9, 53-54℃, 7h]酶解液
吸附 罐內(nèi)溫度保持在53-54℃，用1：1鹽酸調(diào)pH6.8-7，加入活性白陶土7kg，活性炭200g，攪拌，用100 g/L(10%) NaOH溶液調(diào)整pH6.8-7，攪拌吸附1h，再用1：2鹽酸調(diào)pH5.4，停止加熱，靜置片刻，過濾，得澄清濾液。
酶解液[活性白陶土，活性炭]→[pH6.8-7, 1h]濾液
沉淀、干燥 上述澄清濾液迅速用100 g/L(10%) NaOH溶液調(diào)整pH6，并加入澄清液體積10 g/L(1%)的氯化鈉，溶解，過濾至澄明。濾液在攪拌下緩緩加入90%乙醇，含醇達(dá)75%，每隔30min攪拌1次，約攪4-6次，使細(xì)小顆粒增大而沉降，靜置8h以上，吸去上清液，沉淀用無水乙醇充分脫水洗滌2次，抽干，于60-65℃干燥或真空干燥。
濾液[NaCl, 90%]→[pH6, 8h以上]沉淀物[無水乙醇]→[60-65℃]干品
制劑 按配方含硫酸軟骨素20 g/L(2%)，氯化鈉8.5 g/L(0.85%)，稱取標(biāo)示量107%的硫酸軟骨粉(以純品計)，撒入注射用水中，使其膨脹，攪拌溶解，再加入氯化鈉，調(diào)pH5.5左右，加熱煮沸，用布氏漏斗趁熱過濾，濾液加入3-5 g/L(0.3%-0.5%)活性炭迅速加熱至微沸，保持15min，用砂棒包扎濾紙，趁藥液微沸時真空抽濾，濾液冷卻至室溫，補(bǔ)加注射用水至全量，用3號垂熔漏斗過濾至澄明，按每支2ml灌封，滅菌，即得硫酸軟骨素注射液。
干品[NaCl, 注射用水]→[pH5.5]硫酸軟骨素注射液
方法二、稀堿-濃鹽提取法
浸出、提取 將潔白干凈的碎軟骨置于提取罐內(nèi)，加濃度為3-3.5mol/L的氯化鈉溶液(宜用高鹽濃度)使骨渣完全浸沒。用50%氫氧化鈉液調(diào)pHl2-13，攪拌提取10-15h，過濾，濾渣同上操作重提1次。提取過程中應(yīng)隨時校正pH12-13，合并2次提取液。
豬喉（鼻）軟骨[NaOH, NaCl]→[pH12-13, 10-15h]→提取液
鹽酸鹽解 提取液用2mol/L鹽酸調(diào)pH7-8，迅速升溫至80-90℃，保溫20min，冷卻后過濾，使濾液澄清，棄渣，得鹽解液。
提取液[HCl]→[pH7-8, 80-90℃]鹽解液
除酸性蛋白 將鹽解液調(diào)pH2-3，攪拌10min，靜置存放后再濾至澄清，調(diào)pH6.5，加2倍無離子水，使溶液的氯化鈉濃度為1mol/L左右。
鹽解液[水，NaCl]→[pH2-3, pH6.5]濾液
沉淀、干燥 上述溶液加入95%乙醇，使醇的體積分?jǐn)?shù)達(dá)到50%-60%(用乙醇表計量)存放至清，虹吸除上清液，沉淀抽干，脫水干燥，即得硫酸軟骨素成品。
濾液[乙醇]→硫酸軟骨素成品
方法三、酶解—樹脂提取法
將鯨魚軟骨絞碎，加入1mol/L氫氧化鈉溶液浸泡，40℃保溫水解2h或加pH7.5的水浸泡，用蛋白酶55℃保溫水解20h，再加鹽酸中和近中性，過濾，調(diào)整濾液中氯化鈉濃度達(dá)到0.5mol/L。然后，將溶液通過Amberlite IRA-933型離子交換樹脂柱，吸附完畢，用0.5 mol/L氯化鈉溶液洗滌，再用1.8 mol/L氯化鈉溶液洗脫，流速2L/h，洗脫液脫鹽，乙醇沉淀，離心，收集沉淀，真空干燥，即得成品。
鯨魚軟骨漿[1mol/L NaOH, 蛋白酶，HCl]→[40℃, 2h; 55℃, 20h; pH7]濾液[0.5 mol/L NaCl, IRA-933樹脂柱]→洗脫液[乙醇]成品
應(yīng)用此工藝制得的硫酸軟骨素樣品，經(jīng)紙電泳檢查為單一區(qū)帶，抗原物質(zhì)試驗結(jié)果為陰性，含硫量為7.2%。其優(yōu)點是酶水解或稀堿水解與樹脂交換技術(shù)相結(jié)合，保證了硫酸軟骨素分子不降解，解決了成品純度問題。方法簡便，收率高，是一種較有實用價值的制備方法。