"WM35 Cell|人黑色素瘤細(xì)胞

細(xì)胞背景資料：黑色素瘤；女性

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

傳代培養(yǎng)及其操作步驟：原代細(xì)胞培養(yǎng)成功以后，需要進(jìn)行分離培養(yǎng)，否則細(xì)胞會(huì)因生存空間不足或密度過(guò)大，營(yíng)養(yǎng)障礙，影響細(xì)胞生長(zhǎng)。細(xì)胞由原培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)分離稀釋后傳到新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)的過(guò)程稱之為傳代培養(yǎng)。傳代細(xì)胞允許培養(yǎng)的細(xì)胞擴(kuò)增(形成細(xì)胞株)，可以進(jìn)行細(xì)胞克隆，易于保存，但可能喪失一些殊的細(xì)胞和分化征。傳代細(xì)胞形成細(xì)胞株的Zui大利處在于提供了大量持久的實(shí)驗(yàn)材料，便于實(shí)驗(yàn)?！静僮鞑襟E】１)吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液；２)向瓶?jī)?nèi)加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆蓋培養(yǎng)瓶底為宜；３)置３７℃孵箱或室溫(２５℃溫度)下進(jìn)行消化，２~５min后把培養(yǎng)瓶放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮、細(xì)胞間隙增大后，應(yīng)立即中止消化；４)吸出消化液，向瓶?jī)?nèi)加入Hanks液少量，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶，把殘留消化液沖掉，然后再加培養(yǎng)液。如果僅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培養(yǎng)液，終止消化；５)使用彎頭吸管，吸取瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液，按順序反復(fù)輕輕吹打瓶壁細(xì)胞，使之從瓶壁脫離形成細(xì)胞懸液。吹打時(shí)動(dòng)作要輕柔，以防用力過(guò)猛損傷細(xì)胞；６)用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)后，分別接種于新的培養(yǎng)瓶中，置CO２培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)；７)細(xì)胞培養(yǎng)換液時(shí)間應(yīng)根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài)和實(shí)驗(yàn)要求來(lái)確定。一般２～３d后應(yīng)換一次生長(zhǎng)液。待細(xì)胞鋪滿器皿底面，即可使用；也可繼續(xù)傳代擴(kuò)大培養(yǎng)或換成維持液?！咀⒁馐马?xiàng)】１)掌握HAO細(xì)胞消化的時(shí)間，消化時(shí)間過(guò)短時(shí)，細(xì)胞不宜從瓶壁脫落，過(guò)長(zhǎng)的消化會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞脫落、損傷；２)掌握HAO消化濃度，當(dāng)消化液濃度過(guò)GAO時(shí)，消化時(shí)間應(yīng)縮短，過(guò)低時(shí)細(xì)胞消化時(shí)間相對(duì)延長(zhǎng)。

細(xì)胞生長(zhǎng)：貼壁

NCI-BL6細(xì)胞類似產(chǎn)品：：HEC251細(xì)胞、TE15細(xì)胞、BJ1細(xì)胞

ketr 3細(xì)胞類似產(chǎn)品：：HTSMC細(xì)胞、Mv 1 Lu (NBL-7)細(xì)胞、MC-CAR細(xì)胞

HOS細(xì)胞類似產(chǎn)品：：S16細(xì)胞、TE-1細(xì)胞、32D.cl3細(xì)胞

CHL-CL-11細(xì)胞類似產(chǎn)品：：AE1201細(xì)胞、HN4細(xì)胞、MCF7ADR細(xì)胞

LN-229細(xì)胞類似產(chǎn)品：：SK-RC-39細(xì)胞、CCD966SK細(xì)胞、TFK-1細(xì)胞

細(xì)胞物種來(lái)源：人源或鼠源等其它物種來(lái)源

WM35 Cell|人黑色素瘤細(xì)胞

[細(xì)胞產(chǎn)品包裝]鮮活細(xì)胞：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細(xì)胞：１ml凍存管(兩支)

懸浮細(xì)胞不容易轉(zhuǎn)染：懸浮細(xì)胞是指細(xì)胞生長(zhǎng)不依賴支持物表面，在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)生長(zhǎng)，如淋巴細(xì)胞。在實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常會(huì)遇到懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染，其和貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染還是有很大不同的。目前大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室用的是脂質(zhì)體類的轉(zhuǎn)染試劑，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染是基于電荷吸引原理，先形成脂質(zhì)體-DNA復(fù)合物，散布在細(xì)胞周圍，然后通過(guò)細(xì)胞的內(nèi)吞作用，將目的基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)，而脂質(zhì)體復(fù)合物與貼壁細(xì)胞的接觸機(jī)會(huì)比懸浮細(xì)胞GAO出很多倍，所以，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染時(shí)懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率要明顯低于貼壁細(xì)胞。其次，脂質(zhì)體試劑的毒性較大，這就使得懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染更為困難了。另外，懸浮細(xì)胞不易培養(yǎng)，易死亡，也給細(xì)胞轉(zhuǎn)染造成了一定的困難。為了提GAO懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率，可以使用非脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染試劑，如納米材料的。也可以使用電轉(zhuǎn)染方法，針對(duì)懸浮細(xì)胞等難轉(zhuǎn)染細(xì)胞還是挺不錯(cuò)的，電擊對(duì)細(xì)胞有一定的損傷，ZuiHAO選用具有細(xì)胞膜修復(fù)功能的電轉(zhuǎn)染試劑，可以將電擊對(duì)細(xì)胞的傷害降到Zui低，懸浮細(xì)胞不易轉(zhuǎn)染，選對(duì)試劑及良HAO的細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境才是關(guān)鍵。

KYSE 70細(xì)胞類似產(chǎn)品：：REC細(xì)胞、Pt-K1細(xì)胞、Kit225-K6細(xì)胞

SHI1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：RAG細(xì)胞、U266 Bl細(xì)胞、LIM1215細(xì)胞

SCC15細(xì)胞類似產(chǎn)品：：H1092細(xì)胞、NCI-H1694細(xì)胞、Colo699細(xì)胞

WiDr/S細(xì)胞類似產(chǎn)品：：WERI-Rb1細(xì)胞、MDCK (NBL-2)細(xì)胞、Hs-343-T細(xì)胞

細(xì)胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明：來(lái)源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細(xì)胞庫(kù)

KYSE 70細(xì)胞類似產(chǎn)品：：REC細(xì)胞、Pt-K1細(xì)胞、Kit225-K6細(xì)胞

SHI1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：RAG細(xì)胞、U266 Bl細(xì)胞、LIM1215細(xì)胞

SCC15細(xì)胞類似產(chǎn)品：：H1092細(xì)胞、NCI-H1694細(xì)胞、Colo699細(xì)胞

WiDr/S細(xì)胞類似產(chǎn)品：：WERI-Rb1細(xì)胞、MDCK (NBL-2)細(xì)胞、Hs-343-T細(xì)胞

細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞系永生化原理介紹：多數(shù)正常細(xì)胞的壽命是有限的，能傳20-100代，但有些細(xì)胞，尤其是來(lái)自嚙齒類或來(lái)自多數(shù)腫瘤的細(xì)胞，可以產(chǎn)生具有無(wú)限壽命的連續(xù)細(xì)胞系。嚙齒類動(dòng)物細(xì)胞在分離時(shí)核型是正常的，在傳到12代左右以后可能出現(xiàn)危相，多數(shù)細(xì)胞在這個(gè)階段死亡了，但少數(shù)細(xì)胞存活下來(lái)，并擁有了更GAO的生長(zhǎng)率，成為連續(xù)細(xì)胞系。目前認(rèn)為永生化是一個(gè)多步驟的過(guò)程，包括一系列細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)基因(如Rb和p53)失活。目前主要從兩個(gè)方向進(jìn)行操作，病毒基因致永生化和端粒酶誘導(dǎo)的永生化，其原理如下：SV40 LT基因常用于誘導(dǎo)永生化。這個(gè)基因的產(chǎn)物-T抗原，可與Rb和p53結(jié)合。這樣不僅使細(xì)胞增殖的壽命得以延長(zhǎng)，同時(shí)也限制了如p53這樣基因的DNA監(jiān)控活性，從而使基因組的不穩(wěn)定性增加，也增加了向永生化發(fā)展的進(jìn)一步突變的機(jī)會(huì)(如上調(diào)端粒酶或下調(diào)端粒酶抑制物的活性)。用含可調(diào)節(jié)啟動(dòng)子的端粒酶基因進(jìn)行轉(zhuǎn)染，足以形成永生化細(xì)胞。這些基因中已被廣泛應(yīng)用的有：EBV用于淋巴母細(xì)胞樣細(xì)胞；SV40 LT用于黏附細(xì)胞，如成纖維細(xì)胞(Mayne et al., 1996)、 角質(zhì)形成細(xì)胞(Steinberg,1996) 和內(nèi)皮細(xì)胞(Punchard et al.,1996)等;而hTERT則用于間充質(zhì)干細(xì)胞和其他一些細(xì)胞。

RSMC細(xì)胞類似產(chǎn)品：：SU-DH-L5細(xì)胞、TKB1細(xì)胞、UWB1.289細(xì)胞

UMNSAH-DF 1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：EOL1細(xì)胞、SK.MEL.2細(xì)胞、H2052_MM細(xì)胞

TKB1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：Anip[973]細(xì)胞、GM05862細(xì)胞、NCI-H1694細(xì)胞

NCIH2122細(xì)胞類似產(chǎn)品：：LN-382細(xì)胞、OVTOKO細(xì)胞、NCIH1581細(xì)胞

hs 68細(xì)胞類似產(chǎn)品：：MSB1細(xì)胞、MOLP-2細(xì)胞、RBL2H3細(xì)胞

RGC-6細(xì)胞類似產(chǎn)品：：RPMI7666細(xì)胞、RKO-AS45-1細(xì)胞、RCC10 RGB細(xì)胞

NFHIOSE-29細(xì)胞類似產(chǎn)品：：NCM356細(xì)胞、NCI-H2029細(xì)胞、NCIH1341細(xì)胞

210RCY3-Ag1.2.3細(xì)胞類似產(chǎn)品：：C32 [Human melanoma]細(xì)胞、QSG-7701細(xì)胞、NCIH650細(xì)胞

NCI-H1781細(xì)胞類似產(chǎn)品：：253JBV細(xì)胞、NHEK細(xì)胞、ESC-410細(xì)胞

Colon-38細(xì)胞類似產(chǎn)品：：CEM/0細(xì)胞、786-0WT細(xì)胞、LTEP-s細(xì)胞

WM35 Cell|人黑色素瘤細(xì)胞

P 815細(xì)胞類似產(chǎn)品：：SPCA1細(xì)胞、SNU354細(xì)胞、EU-3細(xì)胞

P-815細(xì)胞類似產(chǎn)品：：P3-X63-Ag8細(xì)胞、Human fetal lung fibroblast 1細(xì)胞、Panc-327細(xì)胞

MFE296細(xì)胞類似產(chǎn)品：：SU-DHL1細(xì)胞、CCD-841CoTr細(xì)胞、HBL1細(xì)胞

VP229細(xì)胞類似產(chǎn)品：：SW-1222細(xì)胞、HUT 226細(xì)胞、OCM-1A細(xì)胞

LX-2細(xì)胞類似產(chǎn)品：：MDA-MB-435S細(xì)胞、OVCA433_Bast細(xì)胞、GM04678細(xì)胞

MOLM-13細(xì)胞類似產(chǎn)品：：NCI N87細(xì)胞、Sol8細(xì)胞、WEHI3B細(xì)胞

MOLM-13細(xì)胞類似產(chǎn)品：：NCI N87細(xì)胞、Sol8細(xì)胞、WEHI3B細(xì)胞

PT-K75細(xì)胞類似產(chǎn)品：：KBM5細(xì)胞、NCIH548細(xì)胞、HMVEC細(xì)胞

Human Fetal Thymocyte-8810細(xì)胞類似產(chǎn)品：：HCC-1569細(xì)胞、H-69細(xì)胞、KATO III細(xì)胞

32Dcl3細(xì)胞類似產(chǎn)品：：NIH3T3細(xì)胞、A 2780 CP細(xì)胞、WPMY-1細(xì)胞

MNNG-HOS (TE 85, clone F-5)細(xì)胞類似產(chǎn)品：：SHP-77細(xì)胞、JF305細(xì)胞、SKMEL28細(xì)胞

HTh 74細(xì)胞類似產(chǎn)品：：MDA-MB-415細(xì)胞、GM00637細(xì)胞、IOSE-Mar細(xì)胞

Loucy細(xì)胞類似產(chǎn)品：：Hep G2/C3A細(xì)胞、Mc Ardle 7777細(xì)胞、Hs294T細(xì)胞

HSAS3細(xì)胞類似產(chǎn)品：：PE/CA-PJ-34細(xì)胞、Buffalo Rat Liver-3A細(xì)胞、HUTU80細(xì)胞

MNNG細(xì)胞類似產(chǎn)品：：I90細(xì)胞、Clone 929細(xì)胞、SW 839細(xì)胞

P388.D1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：SKHEP1細(xì)胞、BT 549細(xì)胞、U-87MG ATCC細(xì)胞

M14-MEL細(xì)胞類似產(chǎn)品：：MDA-MB 361細(xì)胞、SW982細(xì)胞、CCD-966SK細(xì)胞

DMS 273細(xì)胞類似產(chǎn)品：：AN-3細(xì)胞、OCI-Ly7細(xì)胞、Hs940-T細(xì)胞

M-14細(xì)胞類似產(chǎn)品：：SW626細(xì)胞、NIH 3T6細(xì)胞、BNL-CL.2細(xì)胞

Kit 225-K6細(xì)胞類似產(chǎn)品：：3T3-F442A細(xì)胞、PIEC細(xì)胞、SK-MEL-3細(xì)胞

SK.MEL.28細(xì)胞類似產(chǎn)品：：H-1770細(xì)胞、U-251細(xì)胞、Z138細(xì)胞

MDA-MB-415細(xì)胞類似產(chǎn)品：：NCI.H23細(xì)胞、QSG7701細(xì)胞、H-1930細(xì)胞

NCI-SNU-878細(xì)胞類似產(chǎn)品：：VERO C 1008細(xì)胞、CCRF-CEM C7細(xì)胞、COR L279細(xì)胞

H-157細(xì)胞類似產(chǎn)品：：U266 B1細(xì)胞、NCI-H1876細(xì)胞、Panc10.05細(xì)胞

BEL 7402細(xì)胞類似產(chǎn)品：：HTR-8/SVneo細(xì)胞、SW403細(xì)胞、NT-2細(xì)胞

ASH3細(xì)胞類似產(chǎn)品：：University of Michigan-Renal Carcinoma-2細(xì)胞、MM1細(xì)胞、NCTC-929細(xì)胞

Tca8113細(xì)胞類似產(chǎn)品：：Hs 695T細(xì)胞、SUDHL-5細(xì)胞、Tu-212細(xì)胞

HT1197細(xì)胞類似產(chǎn)品：：190PT細(xì)胞、MKN1細(xì)胞、A-375細(xì)胞

A253細(xì)胞類似產(chǎn)品：：RPE-hTERT細(xì)胞、ME16C細(xì)胞、LED-WiDr細(xì)胞

WM35 Cell|人黑色素瘤細(xì)胞

HEK293-EBNA1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：16HBE細(xì)胞、M21細(xì)胞、IPECJ2細(xì)胞

MeT 5A細(xì)胞類似產(chǎn)品：：SW1783細(xì)胞、IPI-2I細(xì)胞、Panc 02.03細(xì)胞

RCC-JF細(xì)胞類似產(chǎn)品：：HUVEC-C[HUVEC]細(xì)胞、T47D細(xì)胞、EFM19細(xì)胞

SNU16細(xì)胞類似產(chǎn)品：：CAL39細(xì)胞、FL 62891細(xì)胞、RIN14B細(xì)胞

HKF細(xì)胞類似產(chǎn)品：：H-157細(xì)胞、OV1063細(xì)胞、NCIH520細(xì)胞

Bovine Turbinate細(xì)胞類似產(chǎn)品：：MARC-145細(xì)胞、TCC-PAN2細(xì)胞、RPMI-1846細(xì)胞

HLE細(xì)胞類似產(chǎn)品：：PLC細(xì)胞、D10G41細(xì)胞、NB4細(xì)胞

Panc 8.13細(xì)胞類似產(chǎn)品：：BC-3H-1細(xì)胞、TOV-112D細(xì)胞、Medical Research Council cell strain-5細(xì)胞

MFE 296細(xì)胞類似產(chǎn)品：：SK UT 1細(xì)胞、RPMI-7666細(xì)胞、NCI-SNU-1040細(xì)胞

SW579細(xì)胞類似產(chǎn)品：：Human ErythroLeukemia細(xì)胞、HS766T細(xì)胞、Ej138細(xì)胞

EST50細(xì)胞類似產(chǎn)品：：CCD-1095Sk細(xì)胞、GLRK 13細(xì)胞、SKES1細(xì)胞

MKN1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：MDCK2細(xì)胞、KLN-205細(xì)胞、Ly3細(xì)胞

V79-GalK1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：GM05372E細(xì)胞、NCIH322細(xì)胞、NCIH2196細(xì)胞

HA細(xì)胞類似產(chǎn)品：：HOS/MNNG細(xì)胞、UCW 100細(xì)胞、SCC VII細(xì)胞

ME16C細(xì)胞類似產(chǎn)品：：NCI-H250細(xì)胞、Hs-611-T細(xì)胞、3T3J2細(xì)胞

HEC-1A細(xì)胞類似產(chǎn)品：：Oka-C1細(xì)胞、SK Col 1細(xì)胞、OEC33細(xì)胞

HT1080細(xì)胞類似產(chǎn)品：：PK-13細(xì)胞、PANC.1細(xì)胞、OS-732細(xì)胞

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