"IPI-2I Cell|豬回腸上皮細胞
細胞背景資料:腸;上皮細胞;SV40轉化
細胞形態(tài):上皮細胞樣
養(yǎng)了幾年細胞,說一點自己培養(yǎng)細胞方面的看法:1)培養(yǎng)細胞前,可以看看細胞點說明書,包括細胞正常生長的狀態(tài)圖、傳代、培養(yǎng)基的類型等;2)不同細胞生長周期不同,有的生長很快,比如說MDA-MB-231,傳代的時候取離心懸液的十分之一就已經足夠了,有的又是別慢,等的人心焦,BT474就是,傳代是一分二,復蘇起始的時候兩周多才能長滿,所以就要在培養(yǎng)細胞的過程中多多摸索了;3)對于嬌弱的細胞,就得細心呵護了,胰酶消化不能過久,吹得時候要輕柔,離心時候也要注意轉速和時間,每天都要去看一下細胞,肉眼觀察培養(yǎng)基狀況、顯微鏡下觀察細胞生長狀況;4)凍存細胞復蘇后第二天ZuiHAO更換一次培養(yǎng)基;5)培養(yǎng)箱隔一段時間徹底用酒精棉擦洗一次;6)養(yǎng)細胞Zui大的教訓:不能偷懶!細胞虐我千百遍,我待細胞如初戀。1)不管買的細胞、惠贈的細胞,剛拿到手趕緊做兩件事:檢測是否有支原體污染; 迅速擴增凍存;2)發(fā)現(xiàn)有污染迅速處理掉,別是當你養(yǎng)了很多種細胞時; 細菌污染,真菌污染很容易發(fā)現(xiàn),支原體污染的話,細胞會長的慢,買個支原體檢測的kit定期檢測一下;3)傳代細胞日常的值日清潔是必須的,此外還要定期熏蒸;4)細胞的傳代一定要規(guī)律,保持相同的confluency和傳代時間間隔,不要隨心所欲或者拖延;5)注意個人衛(wèi)生。
細胞生長:貼壁
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細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源
IPI-2I Cell|豬回腸上皮細胞
[細胞產品包裝]鮮活細胞:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞:1ml凍存管(兩支)
細胞培養(yǎng)過程中,總是會出現(xiàn)各種意想不到的問題,一不留神就會全盤皆輸。所謂細胞虐我千百遍,我待細胞如初戀。下面是貼壁細胞的保藏方法,希望對細胞培養(yǎng)初學操作者有所幫助:1)觀察細胞狀態(tài):貼壁細胞密度達到85-90%,即可以細胞凍存形式進行保藏,拍照,記錄細胞狀態(tài);2)細胞清洗:培養(yǎng)皿表面消毒后,轉移至生物安全柜中,去除培養(yǎng)皿中培養(yǎng)液,加入12mlPBS,輕輕搖晃培養(yǎng)皿清洗細胞,隨后吸除PBS清洗液;3)細胞消化:將2ml胰酶加入培養(yǎng)皿中,完全覆蓋細胞,置于顯微鏡下觀察(期間禁止搖晃培養(yǎng)皿),當細胞剛開始脫落時,立即轉移至生物安全柜中,除去大部分胰酶,剩余約0.5ml胰酶,轉移至培養(yǎng)箱內繼續(xù)消化,每30秒肉眼觀察細胞狀態(tài),至細胞成流沙狀完全脫落,轉移至生物安全柜中,加入12ml完全培養(yǎng)基,終止消化;4)細胞離心:將終止消化后的細胞懸液吹打均勻,吸取至15ml離心管中,1000r/min(110g),離心3min;5)細胞凍存:離心后去除細胞上清液,按照凍存細胞量5*10^5/ml,吸取凍存液重懸細胞沉淀,吹打均勻后分裝至相應的凍存管中,進行凍存;6)細胞保藏:凍存管做HAO標記,放至程序降溫盒中,于4℃冰箱放置30min,轉移至-80℃超低溫冰箱過夜,將過夜后的凍存細胞轉移至液氮中保藏。
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細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。
細胞來源說明:來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫
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細胞生長特性:貼壁
細胞培養(yǎng)中的污染分為兩類,化學污染和生物污染;生物污染包括比較容易發(fā)現(xiàn)的細菌、霉菌和酵母的污染,和較難發(fā)現(xiàn)的病毒、支原體和其他細胞的污染。細菌、霉菌和酵母到處存在,它們能在合適的環(huán)境中非??焖俚纳L。這些污染比較容易觀察到,它們往往會使其污染的培養(yǎng)液產生可見的變化,或者通過顯微鏡觀察就可以看見。由于病毒有種屬異性,所以病毒污染的概率比較小。但是病毒污染難于發(fā)現(xiàn),因為病毒顆粒別微小,一般的實驗室都沒能力檢查細胞培養(yǎng)中污染的病毒。由于病毒一般潛伏在細胞內,對整個細胞培養(yǎng)不是致死的,所以它可能會使研究人員長期得到受病毒影響的細胞的實驗結果。1956年Robinson及其同事首次發(fā)現(xiàn)細胞培養(yǎng)中的支原體污染。90年代初的一個調查發(fā)現(xiàn),在美國培養(yǎng)的細胞中,至少有15%被支原體污染。由于支原體沒有細胞壁,在細胞培養(yǎng)液中幾乎是透明的,同時對常用于細胞培養(yǎng)中的抗生素不敏感,不引起pH變化,不使培養(yǎng)液渾濁,所以支原體污染不容易被發(fā)現(xiàn),但是其存在會影響實驗的結果。培養(yǎng)多種細胞時操作不當,會導致細胞的交叉污染。由于不同細胞的生產速率不同,污染的生長速率快的細胞終會完全取代被污染的細胞。
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關鍵字: IPI-2I Cell|豬回腸上皮細胞;
上海冠導生物工程有限公司,先后從ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、PromoCell、ScienCell、JCRB等國內外細胞庫引進細胞2000余株。以此為契機,公司組建了冠導細胞庫,我司細胞均由資深細胞培養(yǎng)工程師進行培養(yǎng)。我司可以提供的細胞有:①細胞系②原代細胞③穩(wěn)轉株④耐藥株⑤標記細胞⑥細胞配套試劑等。