"NCI-H196 Cell|人肺癌細胞
細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
細胞形態(tài):上皮細胞樣
養(yǎng)了幾年細胞,說一點自己培養(yǎng)細胞方面的看法:1)培養(yǎng)細胞前,可以看看細胞點說明書,包括細胞正常生長的狀態(tài)圖、傳代、培養(yǎng)基的類型等;2)不同細胞生長周期不同,有的生長很快,比如說MDA-MB-231,傳代的時候取離心懸液的十分之一就已經足夠了,有的又是別慢,等的人心焦,BT474就是,傳代是一分二,復蘇起始的時候兩周多才能長滿,所以就要在培養(yǎng)細胞的過程中多多摸索了;3)對于嬌弱的細胞,就得細心呵護了,胰酶消化不能過久,吹得時候要輕柔,離心時候也要注意轉速和時間,每天都要去看一下細胞,肉眼觀察培養(yǎng)基狀況、顯微鏡下觀察細胞生長狀況;4)凍存細胞復蘇后第二天ZuiHAO更換一次培養(yǎng)基;5)培養(yǎng)箱隔一段時間徹底用酒精棉擦洗一次;6)養(yǎng)細胞Zui大的教訓:不能偷懶!細胞虐我千百遍,我待細胞如初戀。1)不管買的細胞、惠贈的細胞,剛拿到手趕緊做兩件事:檢測是否有支原體污染; 迅速擴增凍存;2)發(fā)現(xiàn)有污染迅速處理掉,別是當你養(yǎng)了很多種細胞時; 細菌污染,真菌污染很容易發(fā)現(xiàn),支原體污染的話,細胞會長的慢,買個支原體檢測的kit定期檢測一下;3)傳代細胞日常的值日清潔是必須的,此外還要定期熏蒸;4)細胞的傳代一定要規(guī)律,保持相同的confluency和傳代時間間隔,不要隨心所欲或者拖延;5)注意個人衛(wèi)生。
細胞生長:貼壁
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細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源
NCI-H196 Cell|人肺癌細胞
[細胞產品包裝]鮮活細胞:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞:1ml凍存管(兩支)
收到常溫復蘇細胞后,具體操作步驟1)首先,觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完HAO,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請拍照,并及時與技術支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù))。2)用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)2-4小時,以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。3)仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如貼壁性(貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。4)靜置完成后,取出細胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù));建議細胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。5)貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)基,預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。6)懸浮細胞:將細胞培養(yǎng)瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內,1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時,若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng),補加培養(yǎng)基至5ml;若細胞密度未超過80%,將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。溫馨提醒:1)可將培養(yǎng)瓶內多余的培養(yǎng)基轉移至50ml無菌離心管中,備用;細胞首次傳代時,可以將該培養(yǎng)基按照一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合使用,讓細胞逐漸適應培養(yǎng)條件。2)確認細胞狀態(tài)良HAO后,應及時將部分細胞凍存,再進行后續(xù)的實驗,避免后期實驗失誤可能發(fā)生細胞污染或死亡而導致的細胞丟失,影響后續(xù)實驗。建議客戶收到細胞后前3天,100X、200X、400X各拍3張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于后續(xù)和技術支持溝通交流。
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細胞傳代方法:1:4-1:6傳代;每周換液2-3次。
細胞來源說明:來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫
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細胞生長特性:貼壁生長
細胞傳代比例:對于有限細胞系,傳代時以二、四、八或十六倍(傳代比率分別是2、4、8和16)降低細胞密度,計算群體倍增數(shù)更容易(即分別是傳代比率2對應1次倍增,4對應2次倍增,8對應3次倍增,16對應4次倍增);例如,一傳八的培養(yǎng)物需要3次倍增才能達到原來相同的細胞密度。脆弱的或生長緩慢的細胞系通常一傳二,而有活力的,生長快速的細胞系可以一傳八,甚至一傳十六。有些連續(xù)細胞系可一傳五十或一傳100。一旦細胞系變?yōu)檫B續(xù)細胞系(通常經過150次或200次倍增以上),細胞濃度是主要參數(shù),培養(yǎng)濃度應降至10(4)/ml--10(5)/ml之間??蛇x擇傳代間隔合適的傳代比率或稀釋度,或許為1周或2周,同時要保證:細胞密度不可稀釋過低,使其延遲期合理(在24小時以內),可重新進入生長周期;而且在下次傳代前不進人平臺期。
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關鍵字: NCI-H196 Cell|人肺癌細胞;
上海冠導生物工程有限公司,先后從ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、PromoCell、ScienCell、JCRB等國內外細胞庫引進細胞2000余株。以此為契機,公司組建了冠導細胞庫,我司細胞均由資深細胞培養(yǎng)工程師進行培養(yǎng)。我司可以提供的細胞有:①細胞系②原代細胞③穩(wěn)轉株④耐藥株⑤標記細胞⑥細胞配套試劑等。