"BEL-7404 Cells(贈送Str鑒定報告)|人肝癌細胞

細胞背景資料：用Northernblot方法，未能檢測到細胞中１.３kbLFIRE-１/HFREP-１mRNA的表達。

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

體內細胞培養(yǎng)及其操作步驟：【瘤細胞懸液接種】１)無菌選取生長良HAO(有光澤，淡紅色)瘤組織或對數(shù)生長期培養(yǎng)瘤細胞；２)在PBS中將瘤組織剪碎后用勻漿器研磨，經８０～１００目篩網過濾成細胞懸液；３)培養(yǎng)細胞應用PBS洗兩遍；４)計數(shù)并調整細胞濃度至１０７～１０８／ml；５)常規(guī)消毒后，于接種部位(通常為背部或腋窩腹股溝皮下)用醫(yī)用注射器皮下潛行一段后注入細胞懸液(０.１ml／部位，＞１０６細胞)。初次接種成功率低，細胞數(shù)盡可能多一些；６)次日注意觀察動物一般情況。初次接種一般有一段較長的潛伏期，以后隨著傳代潛伏期逐漸縮短，Zui后固定為一個相對穩(wěn)定的時間?！靖顾龅慕⑴c腹水瘤的接種】將實體瘤細胞直接種于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤細胞，將這種腹水反復傳代，即可成為腹水瘤。初次傳代時，腹水常呈血性(含大量紅細胞)，反復傳代后腹水逐漸變成乳白色。腹水瘤的接種過程如下。１)將凍存或培養(yǎng)的腹水瘤細胞離心和洗滌，進行細胞計數(shù)；２)消毒動物，左下腹穿刺接種１０６腹水瘤細胞；３)接種腹水瘤細胞后約７~１２d，待小鼠腹部明顯膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部，用９號針頭抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽３~５ml；４)抽取的腹水經３０００rpm離心１５min，收集上清，分裝凍存?zhèn)溆谩?/p>

細胞生長：貼壁

KM H-2細胞類似產品：：NCI-H1838細胞、Kit 225細胞、AZ521細胞

NCI-H220細胞類似產品：：HEC-1A細胞、WM 239細胞、MUTZ1細胞

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PCI:SG231細胞類似產品：：NCTC-1469細胞、NCI747細胞、A10細胞

BEL-7404 Cells(贈送Str鑒定報告)|人肝癌細胞

細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

[細胞產品包裝]鮮活細胞：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞：１ml凍存管(兩支)

細胞培養(yǎng)更HAO經驗詳解：1)收到細胞，首先要鏡檢：觀察細胞形態(tài)是否正常，對于貼壁細胞則要注意看貼壁情況是否很HAO，觀察細胞密度，有疑議及時咨提供細胞的技術人員。 由于運輸?shù)臅r間或者溫度的變化，很多貼壁細胞在盛滿培養(yǎng)基的瓶子里生長的狀態(tài)和平時會有點不一樣，主要是貼壁牢固問題。比如293T，平時貼壁就不是很牢，在裝滿的培養(yǎng)基瓶子里面，會發(fā)生大片的脫落，細胞聚集在一起，但是細胞生長還是正常的，通過離心收集，加以胰酶的消化，重新打散，又可以正常的貼壁生長。2)當通過上一步的觀察，細胞初步沒有問題時，進行下一步操作。當收到的細胞密達到80%左右時，則處理如下：棄除瓶中大部分培養(yǎng)基，僅保留5到10mL培養(yǎng)所需的常規(guī)培養(yǎng)基；或更換新鮮的培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中，隨后每天觀察。 細胞在低于正常生長溫度情況下，會調整為靜止期，或者慢速生長期，恢復37度的環(huán)境至少3個小時左右，才能重新調整到接近對數(shù)生長期的狀態(tài)，在對數(shù)生長期進行細胞的傳代會大大增加傳代的成功率，和細胞的存活率。3)如果經步觀察發(fā)現(xiàn)細胞密度超過90%，并且細胞狀態(tài)很HAO時，則復溫后2個小時需要立即傳代。傳代的比例應依據(jù)不同的細胞而定。對于生長比較快，狀態(tài)穩(wěn)定，不易受外界影響的細胞可以一次多傳幾瓶；對于生長較慢，細胞比較薄，狀態(tài)容易波動的細胞類型，一次少傳些，每瓶細胞密度大些，便于穩(wěn)定生長。至于一些比較陌生的細胞，次處理也可以依照第二種情況。

細胞傳代方法：消化３-５分鐘。１：２。３天內可長滿。

SJCRH30細胞類似產品：：SBC-3細胞、RCC-10RGB細胞、NCI660細胞

Beta-TC-6細胞類似產品：：HEK 293-F細胞、2T細胞、OCI-Ly10細胞

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細胞來源說明：來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫

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細胞生長特性：貼壁生長

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BC3H1細胞類似產品：：T9細胞、OC 316細胞、NS-20Y細胞

如何進行細胞復蘇：１)從液氮容器中取出凍存管，直接浸入３７℃溫水中，并不時搖動令其盡快融化；２)從３７℃水浴中取出凍存管，打開蓋子，用吸管吸出細胞懸液，加到離心管并滴加１０倍以上培養(yǎng)液，混勻；３)離心，１０００rpm，５min；４)棄去上清液，加入含１０%小牛血清培養(yǎng)液重懸細胞，計數(shù)，調整細胞密度，接種培養(yǎng)瓶，３７℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；５)次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)?！緶剀疤嵝选浚?從增殖期到形成致密的單層細胞以前的培養(yǎng)細胞都可以用于凍存，但ZuiHAO為對數(shù)生長期細胞。在凍存前一天ZuiHAO換一次培養(yǎng)液；２)將凍存管放入液氮容器或從中取出時，要做HAO防護工作(戴棉手套)，以免凍傷；３)凍存和復蘇ZuiHAO用新配制的培養(yǎng)液。細胞復蘇的時候，有些初次實驗員將凍存管從液氮中取出后，放在室溫下，經常發(fā)生凍存管爆炸，該怎么避免出現(xiàn)這種情況嗎？其中在擰緊凍存管的時候是否有哪些細節(jié)要注意的？一般常用的方法是取出凍存管后在超凈工作臺中用酒精棉球擦試管口，再稍擰松蓋子，再放３７度水浴鍋中搖溶，在將細胞轉移到裝有３７度預熱過的培養(yǎng)基的試管中，迅速離心，再用培養(yǎng)基洗一遍。

正確的細胞復蘇需知事項：細胞凍存HAO了，接下來要注意什么問題呢？沒錯，就是記得到時間了，拿出來復蘇。那么，細胞復蘇的過程中又有哪些該注意的事項呢？細胞活力和形態(tài)檢查的作用何在？活力檢查——千萬不要使用不健康的細胞，可能有污染(真菌、支原體等)，如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細胞的固有形態(tài)和生長行為。凍存細胞：補充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細胞的前一天補充新的培養(yǎng)液。在細胞長至７０%單層時收獲細胞，計數(shù)活細胞數(shù)，用凍存液調整細胞密度~５ x１０６ Cell s/ml (根據(jù)不同的細胞類型調整)；凍存液——用凍存液洗細胞并用凍存液重懸細胞，有不同類型的凍存液，根據(jù)細胞類型選擇Zui合適的凍存液(常用的凍存液成分有)：５-１０% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質；５-１５%甘油；如果細胞在無血清培養(yǎng)基內生長，應在５０%條件培養(yǎng)基內(細胞在無血清培養(yǎng)基內生長２４小時)內凍存和復蘇。在凍存管上標記HAO細胞類型，日期，凍存人等信息，并保證每凍存管不超過１.５ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以Zui快的速度轉移凍存管知液氮罐內，因此，此步驟ZuiHAO使用干冰，或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內。此外還要注意，在凍存管上沒有足夠的空間記錄細胞的詳細信息，做HAO記錄是非常非常重要的！還有一個Zui重要的，一定要在異地的液氮罐內保存同樣的一份細胞，以免其中的一個液氮罐出現(xiàn)問題！細胞正確的復蘇方式和正確的凍存方式同樣重要，熟記以下要點：當從液氮罐內取出細胞時，有可能會出現(xiàn)凍存管破裂的情況，使用保護面罩和防護服十分必要；其實，細胞復蘇只是一個簡單的實驗，不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細節(jié)，不然，也不一定會盡如人意。例如說，人身健康方面：一定要記得做HAO防凍工作，戴上護目鏡；盡量降低DMSO對細胞的損傷等等。

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