熒光染料的優(yōu)點:
使用簡便;
可以與任何PCR產(chǎn)物結合;
價格便宜;
熒光染料的缺點:
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產(chǎn)物會影響結果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決。
總的來說,SYBR Green I方法是一種最基礎也最常用的Real-time qPCR實驗手段。
產(chǎn)品名稱 |
疥螨通用探針法熒光定量PCR試劑盒 |
英文名稱 |
Sarcoptidae ssp. |
貨號 |
XGR97207 |
熒光化學物質:
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質可分為兩種:熒光探針和熒光染料?,F(xiàn)將其原理簡述如下:
1. TaqMan熒光探針:PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個體化用藥分析的首選技術平臺。
2. SYBR熒光染料:在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標:是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結構的莖環(huán)雙標記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補配對,導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近,不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后,退火過程中,分子信標中間部分與特定DNA序列配對,熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括絕對定量和相對定量)和定性分析。
主要服務:DNA或RNA的絕對定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術:引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
人類肝素酶(HPA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 別稱:HPSE, HPR1, HPSE1, HSE1 Human HPA(Heparanase) ELISA Kit 用途 該試劑盒用于體外定量檢測Human 血清,血漿或其他生物體液中天然及部分重組HPA濃度
CF32363 Rat Brain Striatum Neuron amp, 4M cells Clonetics cells AMP
CF32363 Mouse Hippocampal Neurons Clonetics cells AMP
CF32363 Mouse C57 Mixed Astrocytes Clonetics cells AMP
CF32363 Rat Embryonic DRG Neurons Clonetics cells AMP
CF32363 Rat Cerebellum Neurons Clonetics cells AMP
禽流感病毒H9亞型實時熒光PCR檢測試劑盒TZidovudine5167齊多夫定
禽流感病毒H5亞型實時熒光PCR檢測試劑盒TXanthorin175265
季節(jié)性流感H3亞型實時熒光PCR檢測試劑盒TXanthopurpurin51831,3-二羥基蒽醌
季節(jié)性流感H1亞型實時熒光PCR檢測試劑盒TXanthinol nicotinate4374煙酸占替諾
甲型H1N1亞型流感病毒實時熒光PCR檢測試劑盒TWithaphysalin S9491723
3-Ethoxyandrosta-3,5-dien-17β-ol 26614-48-2 中文名:3-乙氧基雄-3,5-二烯-17β醇 分子式:C21H32O2 土壤堿性0酸酶(S-AKP/ALP)試劑盒 可見分光光度法 50管/48樣
17-Ethylendioxyandrosta-1,4-dien-3-one 2398-63-2 中文名:17-亞乙二氧基-雄-1,4-二烯-3-酮 分子式:疥螨通用探針法熒光定量PCR試劑盒C21H28O3 土壤纖維素酶(S-CL)測試盒 可見分光光度法 50管/24樣
3β-Acetoxy-5α-androstan-17β-ol 3090-70-8 中文名:3-乙酰基-5α-雄烷二醇 分子式:C21H34O3 土壤酶(S-CAT)測試盒 紫外分光光度法 50管/24樣
17β-Benzoyloxy-androsta-1,4-dien-3-one 19041-66-8 中文名:17β-苯甲酰氧基-雄甾-1,4-二烯-3-酮 分子式:C26H30O3 土壤還原酶(S-)測試盒 可見分光光度法 50管/24樣
5α-Androstane-3β,17β-diol 571-20-0 中文名:5α-雄烷二醇 分子式:C19H32O2 土壤蔗糖酶(S-SC)測試盒 可見分光光度法 50管/24樣
產(chǎn)品及特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量保守序列設計的專一性引物,與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
關鍵字: 疥螨通用探;探針法;熒光定量PCR試劑盒;Sarcoptidae ssp.;XGR97207;
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