PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測
產(chǎn)品名稱 |
英文名稱 |
貨號 |
禽腺病毒A型探針法熒光定量PCR試劑盒 |
Fowl Adenovirus(FAdV-A) |
XGR96755 |
【結(jié)果分析條件設(shè)定】
u 基線(Baseline)設(shè)定:應(yīng)選擇該次實驗指數(shù)擴(kuò)增前所有樣本熒光信號比較穩(wěn)定的一段區(qū)域(所有樣本熒光信號無較大波動),起始點(Start)應(yīng)避開熒光采集起始階段的信號波動,終止點(End)應(yīng)比最早出現(xiàn)指數(shù)擴(kuò)增的樣本Ct值減少1~3個循環(huán),建議基線設(shè)為6~15。
u 閾值(Threshold)設(shè)定:將閾值線設(shè)定在剛好超過正常陰性質(zhì)控品擴(kuò)增曲線的最高點。
【質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)】
1. 陰性質(zhì)控品的檢測結(jié)果應(yīng)為陰性,無指數(shù)擴(kuò)增期,Ct=40或無Ct;
2. 陽性質(zhì)控品的檢測結(jié)果應(yīng)為陽性,有明顯的指數(shù)擴(kuò)增期,Ct值應(yīng)小于等于35;
3. 以上要求需在一次實驗中同時滿足,否則該次實驗視為無效。
【結(jié)果判斷】
1. 陽性:有明顯的指數(shù)擴(kuò)增期,且Ct<38;
2.可疑:有明顯的指數(shù)擴(kuò)增期,且38≤Ct<40,此時樣本為可疑樣本;對于可疑樣本建議復(fù)核一次,若復(fù)核結(jié)果Ct<40且有指數(shù)擴(kuò)增期,則判定為陽性,否則判定為陰性;
3. 陰性:無指數(shù)擴(kuò)增期,Ct=40或無Ct值均判定為陰性樣本。
【對檢驗結(jié)果的解釋】
1. 實驗室環(huán)境污染、試劑污染、樣品交叉污染會出現(xiàn)假陽性結(jié)果;
2. 試劑運輸、保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降,可能會導(dǎo)致出現(xiàn)假陰性結(jié)果。
具有下列特點:
1. 一站式,足夠 50 次酶切-連接反應(yīng)、50 次預(yù)擴(kuò)反應(yīng)和 1600 次 AFLP PCR(PCR 按 30 uL 體系計算),但不包括 DNA 純化和帶型分析試劑(如 PAGE 電泳試劑和 銀染試劑)。
2. 本系列產(chǎn)品提供 EcoRI-MseI 組合,適用于 GC 含量在 50%以上的基因組。對 GC 含量在 50%以下的基因組,需從本公司采購 AFLP(EcoRI-TaqI)組合。
3. 各種參數(shù)都經(jīng)過優(yōu)化,一次 PCR 所得 AFLP 片段數(shù)一般在 10-100 之間,可重復(fù) 性好,誤差小于 0.6%。4. 本產(chǎn)品適用于基因組在 500 Mb-6000 Mb 的材料(如動物和植物),對于基因組 在 50-500 Mb 的材料(如細(xì)菌和真菌)或 50Mb 以下的材料(如質(zhì)粒,cosmid, BAC,YAC 和 PAC 等),需要分別另購專門的+1 型預(yù)擴(kuò)引物混合液和+3 型 EcoRI 引物(8 種)AFLP 引物對。
實驗外包:
1.基因組學(xué):基因芯片、SNP檢測、DNA甲基化檢測、生物信息學(xué)分析
2.轉(zhuǎn)錄組學(xué):microRNA芯片、LncRNA芯片、表達(dá)譜芯片、RNA-seq
3.蛋白質(zhì)組學(xué):2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因檢測:DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白質(zhì)檢測:Western blot、Co-ip EMSA、CHIP、免疫熒光、ELISA
6.病理檢測:HE染色、特殊染色、組織切片、免疫組化、流式細(xì)胞分選
7.代謝組學(xué):GC-MS、LC-MS、NMR
8.細(xì)胞及動物模型:原代細(xì)胞、細(xì)胞模型、動物模型構(gòu)建
開環(huán)異落葉松樹脂酚Secoisolariciresinol9388-29-820mg HumanprocollagenⅢN-terminalpeptide,PⅢELISAKit人Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 脫氧膽酸鹽檸檬酸鹽瓊脂 (Hynes) (CM0227) Oxoid incubation media 脫氧膽酸鹽檸檬酸鹽瓊脂 (Hynes) (CM0227) Oxoid 人骨骼肌成肌細(xì)胞(HSkMM)(5×105) 小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs) Mouse 1120-02-1溴化正硬脂基三甲基銨Octadecy trimetxyl ammonium bromide
馬松子Melochia corchorifolia (5S)-1,5,6,7-四輕-3-甲氧基-2-甲基-5-心基-4,8-喹林二同 222629-77-8 C19H29NO3 ≥95% 特拉坐嗪 雜質(zhì)N(Y000062 Rabbit neuroophin 4 (-4) ELISA Kit 兔子神經(jīng)營養(yǎng)因子4(-4)ELISA試劑盒 Schaedler Anaerobic Agar Schaedler 厭氧瓊脂 Oxoid 500G incubation media Schaedler Anaerobic Agar Schaedler 厭氧瓊脂 Oxoid 500G NLK Others Human 人 nemo-like kinase / NLK 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) AmphotericinB 50mg/100mg/1g原裝 Amresco E437
禽腺病毒A型探針法熒光定量PCR試劑盒馬松子Melochia corchorifolia (5S)-1,5,6,7-四輕-3-甲氧基-2-甲基-5-心基-4,8-喹林二同 222629-77-8 C19H29NO3 ≥95% 特拉坐嗪 雜質(zhì)N(Y000062 Rabbit neuroophin 4 (-4) ELISA Kit 兔子神經(jīng)營養(yǎng)因子4(-4)ELISA試劑盒 Schaedler Anaerobic Agar Schaedler 厭氧瓊脂 Oxoid 500G incubation media Schaedler Anaerobic Agar Schaedler 厭氧瓊脂 Oxoid 500G NLK Others Human 人 nemo-like kinase / NLK 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) AmphotericinB 50mg/100mg/1g原裝 Amresco E437
對照品鹽酸乙胺丁醇100165-200103檢查 ELISAKitPD雞白痢抗體檢測規(guī)格:48T/96T 馬尿酸培養(yǎng)基 100 用于彎曲桿菌的馬尿酸水解試驗(GB標(biāo)準(zhǔn)) 人主動脈平滑肌細(xì)胞 (HASMC)( 5×105 ) HK-2, 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞 Human 5-[4-(metxylthio)pxenyl]thiopxene-2-carboxylic acid 870703-97-2
服務(wù)流程:
禽腺病毒A型探針法熒光定量PCR試劑盒接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。